论文部分内容阅读
兰州百合(Lilium davidian var.unicolor)和细叶百合(Lilium pumilum DC.Fisch.)是原产于我国的野生百合,具有较高的观赏价值和经济价值,但种球繁殖周期较长,繁殖系数较低。体细胞胚发生具有再生效率高,繁殖速度快等特点,对于百合的种质保存,种球繁殖等具有重要意义。生长素作为一种重要的植物激素,在植物生长发育过程中起重要调节作用,目前有关内源生长素对体细胞胚发生调控机理尚未明了。本研究利用超高液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对两种百合体细胞胚发生过程中内源生长素含量进行了测定,根据实验室前期测序结果筛选出生长素信号转导过程中起调控作用的miR393b及靶基因TIR1,克隆了mi R393b成熟体序列,对miR393b及靶基因TIR1进行了表达分析。为进一步研究内源生长素在百合体细胞胚发生过程中的作用奠定了基础。主要结论如下:1.内源生长素含量测定两种百合中内源生长素含量均存在两次峰值。在细叶百合中,培养15 d胚性细胞以内起源形式出现时生长素含量达到最大值,培养42 d胚性愈伤组织Ⅱ阶段出现第二个峰值。在兰州百合中,培养12 d胚性细胞以内起源形式出现时生长素含量达到最大值,培养35 d球形胚阶段出现另一个峰值。由此可以推测当胚性细胞以内起源形式出现时需要较高水平的内源生长素,高水平的内源生长素也有助于体胚的成熟。2.miR393b克隆利用特异茎环引物反转录法,分别对细叶百合lpu-miR393b及兰州百合lda-miR393b进行克隆,成功获得了两种百合miR393b成熟体序列,长度均为22 nt。3.miR393b及其靶基因TIR1表达分析根据荧光定量结果可知,两种百合中miR393b与靶基因TIR1都大致呈负相关关系。细叶百合中,lpu-miR393b在培养0 d初始外植体中表达量最高,在培养56 d棒状胚阶段表达量最低,在体细胞胚发生过程中整体呈先下降后上升再下降的趋势,靶基因TIR1在培养42 d胚性愈伤组织Ⅱ阶段表达量最高,在培养28 d胚性愈伤组织Ⅰ阶段最低,在胚性细胞增殖过程中维持在较高水平;兰州百合中lda-miR393b在培养9 d胚性细胞以外起源形式出现时表达量最高,随着体胚的进一步发育开始降低,在培养28 d胚性愈伤组织中表达量最低;靶基因TIR1在培养28 d胚性愈伤组织阶段表达最高。由此可见在百合体胚发生过程中miR393b对靶基因TIR1可能起负调控作用,且高水平的TIR1有利于胚性细胞增殖以及体胚成熟。