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节球藻毒素是泡沫节球藻的次级代谢产物,广泛分布于蓝藻水华爆发水域,能损害鱼类免疫系统,影响鱼类正常的生理机能,对鱼类生存造成危害。本研究选用藻食性鲤科鲫鱼(Carassius auratus)为材料,采用离体细胞培养体外诱导方法,通过流式细胞仪凋亡率测定、共聚焦激光显微镜和透射电镜细胞结构观察、琼脂糖凝胶电泳DNA-Ladder检测技术研究节球藻毒素对鱼体免疫细胞的毒效应。在此基础上,深入研究了节球藻毒素对鲫鱼淋巴细胞毒性的分子机理。共聚焦激光显微镜实验结果表明,空白组细胞核质呈现出均匀的荧光,节球藻毒素诱导组的细胞则表现为颗粒状荧光碎片。透射电镜实验结果展示了节球藻毒素暴露后的鲫鱼淋巴细胞呈现的典型细胞凋亡形态学特征,处理组细胞浆内空泡增多,细胞胞质浓缩,胞核染色质发生凝集等现象,对照组细胞则表现为细胞形态规则,核染色质分布均匀。琼脂糖凝胶电泳实验和流式细胞仪检测结果均显·示,节球藻毒素可诱导细胞DNA片段化,分别出现典型的细胞凋亡特征DNA-Ladder和亚二倍体峰；1、5、10、100μg/L节球藻毒素处理12h后,淋巴细胞凋亡率分别达到15.76%、17.36%、20.34%、44.21%,而对照组的仅为2.4%.结果表明,节球藻毒素可以诱导鲫鱼淋巴细胞发生凋亡。研究还发现,节球藻毒素可以提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位,上调细胞内钙离子浓度,下调Bcl-2基因]mRNA表达量,上调Bax的基因mRNA表达量,降低Bcl-2蛋白表达量,上调Bax蛋白表达量,激活Caspase3和Caspase9活性,Caspase8表达则无差异。可见,节球藻毒素诱导鲫鱼淋巴细胞发生凋亡主要表现为线粒体通路,进而可能影响鱼类免疫系统。天然抗氧化剂表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是一类天然抗氧化剂,具有清除氧自由基、抑制细胞凋亡、增强细胞免疫力等功能。节球藻毒素可以诱导细胞发生氧化应激,产生细胞毒性,本研究从抗氧化系统和细胞凋亡两方面研究了10、100、1000μg/L EGCG对100μg/L节球藻毒素诱导组鲫鱼淋巴细胞的调节作用,探讨其对节球藻毒素诱导鱼类细胞毒性的解毒作用机理。实验结果表明,EGCG可以降低节球藻毒素诱导的鱼体免疫细胞氧化损伤,提高胞内SOD和CAT酶活性,增加胞内GSH含量,降低胞内ROS水平,减少细胞脂质过氧化损伤。流式结果表明,10、100、1000μg/L EGCG添加处理12h后,细胞凋亡率分别降低为27.9%、19.1%、13.7%,而100μg/L节球藻毒素诱导组的细胞凋亡率则高达44.2%。Western blot结果表明EGCG可以增加鲫鱼淋巴细胞内Bcl-2蛋白表达,减少Bax和Caspase3蛋白表达。同时,EGCG也可以抑制线粒体膜电位发生崩溃。总之,EGCG可以通过调节Bax/Bcl-2,增加细胞抗氧化水平,阻断细胞凋亡通路中的下游反应进程,抑制鱼体免疫细胞发生凋亡,对节球藻毒素造成的氧化应激细胞毒性进行解毒,保护水体中鱼类免疫系统。