产盾叶薯蓣皂苷酶内生菌的筛选及酶的初步分离

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuzhuoran
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薯蓣皂素为合成甾体激素类药物的重要前体物质,其本身也具有重要的生物活性。薯蓣皂素在盾叶薯蓣植物中主要以甾体皂苷的形式存在,所以传统的生产皂素的方法是用酸性水溶液将药材中的甾体皂苷水解为皂素,但是该方法会产生大量的废水,对环境造成极大的污染且难处理。酶解法温和、环保,是生产薯蓣皂素的新思路。本文以盾叶薯蓣为研究对象,对产薯蓣皂苷酶内生菌的筛选、产薯蓣皂苷酶高效菌的筛选、高效菌生长与产酶关系、薯蓣皂苷酶酶解效率进行了研究,并对薯蓣皂苷酶的提取分离进行了初步研究。主要研究结果如下:(1)采用贴片法和涂布法从盾叶薯蓣植物的根状茎中分离得到内生细菌5株,内生真菌2株。分别用添加了皂苷底物的培养基对内生菌进行固体平板培养和液体摇瓶发酵,用萃取法得到菌株发酵物的提取物;并用薄层层析法和高效液相色谱法对提取物进行薯蓣皂素检测,发现2株内生真菌(SYfx1 13.1、SYfx2 13.2)和2株内生细菌(SYbx313.3、SYbx413.4)的产物中均有薯蓣皂素。(2)用高效液相色谱法对产生的薯蓣皂素进行分析,得SYfx213.2菌转化生成的皂素含量最高,确定SYfx213.2菌为产薯蓣皂苷酶的高效菌。运用光学显微镜和扫描电镜观察高效菌的形态、结构特征,初步鉴定为曲霉属。(3)研究了SYfx213.2菌生长与产薯蓣皂苷酶之间的关系,菌体的生物生长量在第6天达到最高为2.6g/L,第8天产酶情况最好,皂素生成率为65.71%;用超声波破碎法、研磨法、硫酸铵分级沉淀法初步探索了薯蓣皂苷酶提取、分离过程,硫酸铵饱和度为60%时分离效果好。
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