【摘 要】
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①目的:构建沙蚕消化道上皮细胞的cDNA文库,并从中筛选、克隆和鉴定一种具有纤溶活性的蛋白编码基因序列。②方法:分离沙蚕消化道上皮细胞,使用Trizol试剂提取总RNA,纯化mRNA
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①目的:构建沙蚕消化道上皮细胞的cDNA文库,并从中筛选、克隆和鉴定一种具有纤溶活性的蛋白编码基因序列。②方法:分离沙蚕消化道上皮细胞,使用Trizol试剂提取总RNA,纯化mRNA,用MMLV逆转录成cDNA,用Sfi I核酸内切酶酶切后连接到pDNR-Lib质粒中,构建cDNA文库。以SMART试剂盒中已设计好的引物行PCR扩增筛选获得多个克隆,将筛选成功的克隆进行核苷酸测序,将测得的序列所编码的相应蛋白使用分子生物学软件进行功能预测和二级、三级结构的模拟。③结果:获得沙蚕纤溶活性蛋白的编码序列以及插入此基因序列的重组菌。模拟结果显示该序列编码的蛋白与来源于哺乳动物的丝氨酸蛋白酶相似,具有该家族保守的催化位点。④结论:在原核表达系统中成功构建了插入此目的序列的重组菌,该基因序列编码的蛋白有可能成为一种新型的纤溶药物。
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