庚型肝炎病毒非结构蛋白5A区基因片段的表达与结构分析

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对应于庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)NS5A区中的一段cDNA片段(NS53 cDNA),被亚克隆于一达载体pGEX-5X-1中,使之位于编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)的DNA序列下游,并与GST同框.在37℃下经乳糖诱导,此融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中被过量表达,得到分子量约为60KD的GST-NS53融合蛋白.用脲溶法初步纯化了以包涵体形式存在的该融合蛋白.免疫印迹分析证明,该融合蛋白能被庚型肝炎病人血清和制备的抗GST家兔血清特异性地识别.通过Sephacryl S-200HR凝胶过滤层析对GST-NS53融合蛋白包涵体尿素提取液进行变性条件下的纯化,得到纯度为90﹪的TGST-NO53融合蛋白.对包涵体尿素提取液进行了复性.适用谷胱肽亲和层析柱纯化了可溶性GST-NS53融合蛋白,纯度达到92﹪.
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