【摘 要】
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卵母细胞成熟过程中会积累大量的mRNAs和蛋白质以供早期胚胎发育使用,其中大多数的母源因子是组蛋白。复制依赖型的组蛋白mRNAs是真核生物唯一没有polyA尾巴,而是有一个进化上
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卵母细胞成熟过程中会积累大量的mRNAs和蛋白质以供早期胚胎发育使用,其中大多数的母源因子是组蛋白。复制依赖型的组蛋白mRNAs是真核生物唯一没有polyA尾巴,而是有一个进化上非常保守的茎环结构,SLBP通过与这个茎环结构相互作用参与调控RNA的剪接、核质运输、稳定性及其翻译。在爪蟾中,卵母细胞特异表达的xSLBP2与组蛋白mRNA的茎环结构结合阻止其在卵母细胞成熟前翻译成蛋白质。当卵母细胞成熟时,xSLBP1取代xSLBP2与组蛋白mRNA的茎环结合促使其翻译。在牛中,也有两种SLBP: bSLBP和bSLBP2。然而xSLBP2和bSLBP2的表达和定位都不同,暗示着爪蟾和牛组蛋白mRNA的翻译可能有不同的调控机制。 本实验我们对鱼类slbp2的做了研究。我们克隆了银鲫slbp2基因的全长cDNA序列。银鲫slbp2全长cDNA序列包含有975bp的开放阅读框,编码324个氨基酸。银鲫和斑马鱼slbp2基因的氨基酸序列一致性高达83.6%,其中RBD(RNA Binding Domain)保守域氨基酸同源性高达100%。我们的实验结果显示银鲫和斑马鱼slbp2是卵母细胞特异表达基因。Western bolt实验结果显示银鲫和斑马鱼SLBP2在卵子发育早期有较高的表达,卵母细胞成熟后大量降解。通过原位杂交和免疫荧光定位的方法检测了slbp2 mRNA和蛋白质在银鲫和斑马鱼卵子发生过程中的动态变化。结果表明,银鲫和斑马鱼卵子发生过程中slbp2 mRNA和蛋白质的变化基本一致,在Ⅰ期卵母细胞中信号较弱,定位在细胞质中;Ⅱ期卵母细胞中信号最强;在Ⅲ期卵母细胞中,信号明显减弱,到Ⅳ期时随着卵黄物质大量积累,信号几乎不见。银鲫和斑马鱼slbp2的基因产物主要定位在卵母细胞的细胞质中。本研究为进一步研究鱼类slbp2的生理功能提供了实验基础。
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