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【研究背景与目的】肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌的90%以上,我国是世界上原发性肝癌发生率和死亡率较高的国家之一。目前,引起肝细胞癌发生机制尚未完全阐明。大量研究表明,肿瘤的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果,而遗传因素中,microRNA功能失调在肿瘤的发生中发挥重要作用。微小RNA（microRNA,miRNA）是近年来发现的一类长度约为18-24nt的非编码单链小分子RNA,通过与其靶基因3’端非翻译区（3’Untranslated region,3’UTR）相结合而发挥调节作用。MicroRNA-100（miR-100）是miR-99家族成员,在多种肿瘤miR-100的失调被认为与肿瘤恶性程度以及预后密切相关。大量文献报道与癌旁组织相比较,miR-100在肝癌组织中下调,然而miR-100的下调是否能够促进肝细胞癌的发生?其作用机制又是什么呢?上皮样细胞向间质样细胞转化的过程叫做上皮-间质转化（Epithelial to mesenchymal transition,EMT）。在肿瘤发生过程中,EMT发挥关键作用,研究发现Wnt/β-catenin通路与EMT密切相关。但是miR-100下调是否可以激活Wnt/β-catenin信号通路,介导EMT,从而促进肝细胞癌的的发生目前未见报道。【研究方法】1.体外实验:（1）在人正常肝上皮细胞HL02,通过慢病毒转染HL02-miR-100-3p inhibitor,建立低表达miR-100-3p稳定细胞株。（2）通过MTT、软琼脂集落形成、transwell、细胞周期、平板克隆实验检测下调miR-100-3p对HL02细胞的恶性生物学行为影响。（3）通过裸鼠成瘤实验检测下调miR-100-3p对HL02细胞的裸鼠成瘤能力的影响。（4）通过Western blot检测EMT相关marker以及Wnt/β-catenin通路信号分子表达情况。2.体内实验通过miR-100flox/flox小鼠与Alb-Cre+小鼠杂交,建立miR-100肝脏特异性敲除小鼠模型,观察miR-100失活对小鼠表型及HCC自然发生的影响;肝脏病理切片、转氨酶检测评价肝脏组织学及肝功能变化;Western blot和qRT-PCR检测敲除鼠肝组织中miR-100的靶基因IGF1R-β,CDC25A,mTOR以及肝癌相关基因SHP-2的表达情况。【实验研究结果】1.在HL02细胞株中成功构建了低表达miR-100-3p的稳定细胞株。下调miR-100-3p促进了HL02细胞的集落形成、迁移和侵袭的恶性生物学行为,促进了的HL02细胞的裸鼠成瘤能力;而对克隆形成能力、细胞活力以及细胞周期没有影响。下调miR-100-3p通过Wnt/β-catenin通路的激活介导了EMT的发生。2.成功构建miR-100肝脏特异性敲除小鼠模型;肝脏特异性敲除miR-100在早期（<12月）对小鼠的大体表型无明显影响;与miR-100flox/flox（WT）小鼠相比miR-100肝脏特异性敲除小鼠下游靶基因IGF1R-β上调,而mTOR,CDC25A基因水平没有改变;肝癌相关基因SHP-2明显上调。在肝脏特异性敲除miR-100的老年鼠（15月）中未见HCC发生,但是肝脏病理切片显示明显的肝细胞水肿;肝细胞能量代谢偏向于糖酵解表型。【结论】1.下调miR-100-3p通过Wnt/β-catenin诱导HL02细胞发生EMT,从而促进肝细胞癌的发生。2.在肝脏中敲除miR-100在早期对小鼠大体表型无明显影响,但可以促进miR-100靶基因IGFIR-β以及肝癌相关基因SHP-2明显上调;肝脏敲除miR-100的老年鼠肝细胞发生水肿及代谢偏向于糖酵解表型的改变。提示我们,肝癌的发生是遗传和环境因素相互作用的结果,仅仅敲除miR-100难以导致肝癌的自然发生,复制自发肝癌模型可能需要联合使用其它诱导因素,如DEN等。