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目的:通过观察经长波紫外线UVA(365nm)直接照射或预照射两种激发处理后,TiO<,2>纳米薄膜对体外培养的牛晶体上皮细胞和小鼠腹腔巨噬细胞的抑制效应:研究该薄膜影响表面细胞黏附生长的特性。
方法:在玻片上涂覆TiO<,2>纳米薄膜,并以未镀膜玻片为对照。实验分为两部分,第一部分将两种玻片在不同强度(0.102mw/cm<2>和0.825mw/cm<2>)的UVA下照射不同时间(0、10、20、30、40min),观察玻片表面的晶体上皮细胞和巨噬细胞生长的数量和状态;第二部分则将两种玻片先经UVA(0.825mw/cm<2>)预照射不同时间(0、20、40、60、80min)后停止光照,观察各玻片表面的接触角以及晶体上皮细胞和巨噬细胞在其表面黏附的数量和形态。两部分实验均用MTT比色法评估晶体上皮细胞量,并以AO-EB染色法观察其形态;同时用瑞氏染色后计数法测定巨噬细胞量,并以扫描电镜观察其形态。
结果:
第一部分实验发现,镀TiO<,2>纳米薄膜玻片在0.102mw/cm<2>的UVA激发40分钟或0.825mw/cm<2>的UVA激发30分钟时,表面存活的细胞量比未镀膜玻片显著减少(P<0.01),且晶体上皮细胞出现AO-EB染色的凋亡和坏死特征,巨噬细胞出现质膜破裂、细胞崩解的扫描电镜表现。激发时间越长,TiO<,2>纳米薄膜上的细胞量越少,且0.825mw/cm<2>的光源较0.102mw/cm<2>的光源更能激发TiO<,2>的杀伤作用。
第二部分实验发现,镀TiO<,2>纳米薄膜玻片较对照玻片有较小的接触角,当其经UVA预照射达80分钟时,接触角接近0<。> (1.78±0.47<。>)。经预照射20分钟后,TiO<,2>纳米薄膜表面的晶体上皮细胞和巨噬细胞黏附量较对照组显著降低。预照射处理时间越长,镀膜玻片表面的黏附细胞越少,且呈现失活状态。扫描电镜示预照射80分钟后,TiO<,2>纳米薄膜表面黏附的晶体上皮细胞收缩成椭圆形,巨噬细胞丝状伪足消失。而对照玻片经预照射后,黏附细胞仍表现功能活跃的形态。
结论:(1)TiO<,2>纳米薄膜在UVA的激发照射一定时间后,能发生光催化氧化反应,使其表面的晶体上皮细胞和巨噬细胞发生凋亡或坏死。(2)TiO<,2>纳米薄膜的光催化细胞杀伤效应必须以UVA的激发照射为前提,且与光源的强度呈正性量效关系,而与照射时间呈时效关系。(3)TiO<,2>纳米薄膜在UVA预照射处理后,表现出光生超亲水性,且亲水性在停止光照后仍能保持一定的时间。(4)TiO<,2>纳米薄膜经UVA预照射处理后,能在无UVA照射的条件下,明显减少晶体上皮细胞和巨噬细胞的黏附量,降低其黏附后的活化程度。(5)TiO<,2>纳米薄膜能在UVA预照射或照射条件下,明显抑制晶体上皮细胞和巨噬细胞的黏附和生长,因此可能成为具有良好生物相容性之人工晶体的表面修饰剂。