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白蚁是典型的寡氮营养型生物,能单纯地以完好或腐解的木质材料为食。低等木食性白蚁食物来源中含氮量仅为0.5g/kg(干重),而白蚁组织的含氮量却达110g/kg。研究表明白蚁肠道内共生微生物在氮的固定和循环中起着重要的作用,除了从尿酸中回收部分氮,白蚁体内60%的氮来自后肠共生微生物的固氮作用。黑胸散白蚁(Reticulitermes chinese Snyder)是广泛分布于我国的一种低等木食性白蚁,肠道内共生有大量的原核生物和鞭毛虫。
本实验以黑胸散白蚁为对象,采用非培养法对采自湖北地区的黑胸散白蚁肠道共生固氮微生物的多样性进行了研究。利用PCR技术,以根据固氮酶铁蛋白保守区氨基酸序列设计的四对简并引物从白蚁后肠肠液总DNA中扩增出编码固氮酶铁蛋白的基因(nifH)并相应地构建了四个nifH基因的文库。选取不同基因型的克隆进行测序。结果表明,从黑胸散白蚁肠道内克隆到的nifH基因来源于螺旋体、梭状芽孢杆菌、硫酸还原菌、白蚁簇I及甲烷菌等共生菌,与根据16S rRNA基因研究所揭示的该白蚁肠道内共生菌的多样性结果相一致,说明这些共生菌在白蚁体内具有潜在的的固氮酶活性。系统发育分析还表明,绝大多数固氮酶nifH的氨基酸序列与来源于其它木食性低等白蚁的固氮酶nifH的氨基酸序列相似性最高,而只有少数固氮酶nifH的氨基酸序列与来源于高等白蚁的固氮酶nifH的氨基酸序列相似性最高,说明白蚁体内的固氮酶的多样性与宿主的生活类型及其系统发育位置相关。