目的:目前国内部分实验室AT、PC和PS活性以及vWF抗原和活性检测结果的准确性和可比性较差,需要研究结果一致化的方法与评价标准,帮助实施质量改进。本课题对不同检测系统之间结果的可比性进行了研究;对卫生部临床检验中心研制的AT、PC和PS活性检测标准物质和vWF检测标准物质进行了评价和定值,并将标准物质试应用于室内质控和室间质评;尝试探讨抗凝蛋白活性检测不同校准物的校准效果,为促进其检测结果一致化及实施质量改进提供依据。方法:1.检测现状的全国性调查:通过问卷和质控物检测调查,收集并分析国内开展AT、PC和PS活性检测的相关信息,包括检测方式和标本量、所用仪器和与试剂、性能验证与定标、室内质控、参考区间设置等,明确检测现状和存在问题。2.抗凝蛋白活性检测结果一致化相关问题研究:①检测系统性能验证:参照行业标准、国内外指南文件和厂家的要求,明确性能验证的方法和指标,对Sysmex CS-5100血凝仪AT、PC和PS活性检测的性能(包括批内精密度、日间精密度、准确度、正确度和线性)进行验证。②主流检测系统间结果可比性研究究:依据EP9-A3对Sysmex、Stago和IL 3种检测系统AT、PC和PS活性检测结果的可比性进行评价,探讨推进质量改进的方向。③标准物质的制备与评价:制备3个批号的标准物质,依据ISOGuide35《标准样品定值的一般原则和统计方法》,CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和CLSIEP-30《参考物质定值和互通性评价指南》的要求,对标准物质的均匀性、稳定性和互通性进行评价;依据ISO Guide35采用多家实验室联合定值的方式,以NIBSC凝血标准品LOT4为溯源标准,使用3种检测系统(Sysmex、Stago和IL)对标准物质进行定值。④不同校准物校准效果评价:分别用厂家配套校准品、LOT4和自制高浓度水平标准物质对检测系统进行校准,比较不同校准条件下系统间检测结果可比性的变化情况,探讨使用标准物质改进系统间结果可比性的可能性。⑤标准物质室内质控试应用:将标准物质应用于室内质控,计算累积变异系数(CV),并与厂家配套质控品的检测结果进行比较,评价其室内质控应用效果。3.血管性血友病因子检测结果一致化相关问题研究:①在前期均匀性评价良好的基础上,对卫生部临床检验中心研制的vWF标准物质抗原和活性检测进行稳定性评价。②结果一致化相关问题研究:对Stago和IL两种检测系统vWF抗原检测结果的可比性进行分析;对标准物质的互通性进行评价:采用多家实验室联合定值的方式,以NIBSC凝血标准品LOT4为溯源标准,使用Stago和IL两种检测系统对标准物质进行定值。结果:1.问卷和质控物检测调查:235家实验室回报了问卷,其中开展AT、PC和PS活性检测的实验室分别为194、63和50家。所用仪器和试剂以进口品牌为主(占96%以上),最常用的检测系统为Sysmex、Stago和IL仪器及其配套试剂,仪器和试剂配套率均在94%以上。对于AT、PC和PS活性检测,分别有30.4%、33.3%和34.0%实验室未对所用仪器进行性能验证,8.8%、7.9%和14.0%实验室未在更换试剂批号时进行定标,11.3%、17.5%和16.0%实验室未常规开展室内质控,34.9%、26.9%和21.4%实验室仅进行单个浓度水平的质控。分别有4.1%、1.6%和2.0%实验室按年龄分组设置AT、PC和PS活性参考区间,16.0%实验室按性别分组设置PS活性参考区间。质控物检测结果显示,正常水平质控物AT、PC和PS活性检测结果的CV范围分别为5.7%～12.9%、4.2%～7.7%和18.4%～33.1%;异常水平质控物的CV范围分别为13.3%～38.3%、6.1%～14.4%和31.5%～34.5%。使用不同评价标准的及格率存在差异,各项目应根据浓度水平分别选择合适的评价标准。2.抗凝蛋白活性检测结果一致化相关问题研究:①明确了 SysmexCS-5100血凝仪AT、PC和PS活性检测性能验证的方法和指标,其批内精密度、日间精密度、准确度、线性和正确度验证均符合要求。②AT和PC活性检测在Sysmex、Stago和IL检测系统之间的相关性较好(r2>0.95);PS活性检测IL-Stago两系统间、IL-Sysmex两系统间检测结果的r2>0.90,相关性可接受,Stago-Sysmex两系统间检测结果的r2<0.90,相关性略差。AT、PC和PS活性检测在Sysmex、Stago和IL三种系统间检测结果的可比性分别可达到BV-TEa最低、BV-TEa最优和RCPA标准的要求。③3个批号抗凝蛋白活性标准物质(AT/PC/PS201701～201703)的均匀性评价单因素方差分析结果P值均>0.05,表明均匀性良好;AT、PC和PS活性瓶间均匀性不确定度(ubb)分别为0.71%～1.27%、0.83%～1.20%和0.91%～3.74%。将标准物质置于-80℃条件下保存,在观察期8周内AT、PC和PS活性检测结果无趋势性变化,表明标准物质稳定性良好;其长期稳定性不确定度(ults)分别为1.06%～1.78%、1.57～2.97%和1.45%～7.32%。各批号标准物质在Sysmex、Stago和IL三种检测系统间具有互通性。以5家实验室的检测结果均值为定值结果,定值过程不确定度(uchar)分别为 1.89%～2.38%、1.96%～3.13%和 1.88%～7.57%。AT201701～AT201703 批号标准物质的定值结果分别为:(92.5±4.8)%、(78.9±3.8)%和(33.4±5.1)%;PC201701～PC201703批号标准物质的定值结果分别为:(111.4±6.3)%、(85.3±6.4)%和(41.7±3.9)%;PS201701～PS201703批号标准物质的定值结果分别为:(98.9±15.1)%、(65.7±9.0)%和(31.2±3.8)%。④使用厂家配套校准品、LOT4和自制标准物质分别校准后,AT活性检测在Stago和Sysmex检测系统间的可比性分别达到BV-TEa最低、BV-TEa合适和BV-TEa合适水平,PC活性检测可比性均达到BV-TEa最优水平,PS活性检测可比性分别达到BV-TEa合适BV-TEa合适和RCPA的评价标准。⑤室内质控试应用结果显示,AT、PC和PS活性检测标准物质和相近浓度水平的商品质控物的检测结果CV分布范围分别为2.5～7.6%和3.0～8.3%、2.3～2.6%和2.0～4.0%、5.8～7.1%和5.9～9.6%;均小于厂家规定的批间不精密度。3.血管性血友病因子检测结果一致化相关问题研究:①vWF:Ag的检测结果在26个月内无趋势性变化,vWF:A的检测结果在11个月内无趋势性变化,各批号的长期稳定性不确定度(ults)分别为0.70%～1.78%和2.16%～4.56%。②IL-Stago系统间的结果可比性可达到接受BV-TEa合适的要求。LOT4和各批号标准物质在IL和Stago系统间具有互通性。vWF201501～201505批号标准物质抗原检测的定值结果分别为(138±11)%、(89±4)%、(54±3)%、(21 ±2)%和(12±2)%。结论:1.调查结果显示部分实验室在抗凝蛋白活性检测的性能验证和质量控制等方面操作不规范;不同实验室间检测结果可比性较差,需通过制订相关技术要求、加强人员培训及开展全国室间质量评价等方式实施质量改进。2.①以SysmexCS-5100检测系统为代表,对性能验证方法和评价指标开展研究,性能验证方案可为制订相关技术要求和其他实验室开展性能验证提供参考。②AT和PC活性在Sysmex、Stago和IL系统的相关性较好,PS活性稍差;可比性可接受。③AT、PC和PS活性标准物质的均匀性和稳定性良好,在3种主流检测系统间具有互通性,并完成了5家实验室包含3种主流检测系统的联合定值。④凝血标准品LOT4和自制标准物质可用于校准,校准后系统间结果可比性可满足评价标准的要求。⑤自制标准物质室内质控累积CV小于或接近与商品质控物CV,表明其可以应用于日常室内质控。3.血管性血友病因子标准物质(抗原和活性)稳定性良好,在2个主流检测系统间具有互通性,并完成了 8家实验室的联合定值。IL-Stago系统间的结果可比性可达到接受BV-TEa合 的要求。