植物材料在超低温保存过程中，其物质代谢、能量代谢及其它生命活动降至最低限。因而，超低温保存是长期和稳定保存植物种质的有效方法之一。玻璃化超低温保存技术具有操作简单、程序简化及保存效果好等优点，越来越成为超低温保存的主要方法。本试验以离体培养的苹果茎尖作为材料，对玻璃化方法冻存的主要步骤包括继代培养、低温锻炼、预培养、玻璃化冰冻保护剂脱水、冷冻保存、化冻洗涤及再培养进行了优化，筛选了合适的冰冻保护剂PVS3，得到了70％以上的茎尖成活率，并通过对再生苗形态、生化及分子水平的遗传稳定性检测，证明了该方法保存苹果种质资源的可行性。主要实验结果如下： 1．将在高浓度蔗糖溶液(1.5mol．L^-1)和ABA(0.5mg·L^-1)的逆境培养基上生长的苹果试管苗继代培养不同时间，分别置于0～7℃的低温下，锻炼0～6周，发现苹果试管苗茎尖（0.5mm）在逆境培养基上继代培养3个月以上，4～5℃低温下锻炼4周以上，经液氮冷冻之后，成活率较高（69％）。 2．对比不同浓度的蔗糖及蔗糖和甘露醇配合使用对成活率的影响发现，单独使用蔗糖时，以0.7 mol．L^-1的蔗糖预培养效果较好；而蔗糖配合甘露醇时，0.5 mol．L^-1蔗糖加0.2 mol．L^-1的甘露醇效果更好。预培养基中去除NH₄⁺，添加5％的DMSO，对提高成活率也有一定的效果。在1～4d的预培养时间内，所有预培养基上都以预培养2d成活率最高。 3．分析测定了预培养过程中茎尖含水量和含糖量的变化，结果表明，预培养2d时茎尖含水量和含糖量达到或接近最低和最高值，而冻存之后，其细胞活力最高。 4．设计并研究了5种玻璃化保护剂对成活率的影响，筛选出效果较好的PVS3， （二）刘云国：苹果种质资源玻璃化法超低温保存技术及其邀传变异分析其组成为 MS－40％甘油＋45％蔗糖－10％乙H醇＋10％DMSO (W／V。单独使用 PVS3时以90min的处理时间最佳。采用分步脱水，即将PVS3稀释2倍和4倍后，分别处理25min和30min，然后再用PVS3处理80min的效果更好。 5．试验结果表明，茎尖在液氮中的冻存时间不影响成活率。而不同的化冻方法对细胞活力影响较大，35～40℃的水浴化冻法得到的茎尖细胞活力最高，是较好的化冻方式。化冻后用 MS＋l二 mol．L－‘的蔗糖溶液清洗浸泡 30min。清洗过的茎尖接种立去掉N＊。－的恢复培养基MS＋BA 0．6＊g．L’＋NA＊ 0．l＊g．LJ十0A3 0．5 mg·L’上，经过20～30d的生长迟滞期后，进入正常生长，同末经冻存的对照生长量一致。不同基因型的苹果超低温保存耐受力不一样，在试验的6个品种中，“世界一”的成活率最高（sl％）。 6．冻存后恢复生长的小苗可以顺利生长、生根，其外部形态与生长发育情况与对照植株未见差异。比较对照与冻存再生苗叶片及茎的可溶性蛋白SDS－PAGE谱带及POD同工酶图谱未发现差异，RAPD扩增结果也未见有差异。这说明冻存后再生植株在形态、生化和分子水平上的遗传稳定性，初步证明了该保存方法应用于苹果种质资源保存的可行性。