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结直肠癌由于其发病率高和预后差目前仍是严重危害人类健康的常见消化系统恶性肿瘤。近年来随着肿瘤微环境理论逐渐受到人们的重视,肿瘤和间质的相互作用亦成为肿瘤研究热点。越来越多的实验研究表明,肿瘤细胞周围间质可能会分泌某种因子影响肿瘤的发生发展;病理学家已经注意到,在结直肠癌组织中,癌巢周围出现明显的促纤维组织增生,提示在结直肠癌中肿瘤间质细胞尤其是成纤维细胞在肿瘤发生发展发挥着重要的作用。IGFBP7(Insulin-like growth factor binding protein7)即胰岛素样生长因子结合蛋白7,是我们实验室首次在结肠腺癌-正常粘膜的差减文库中筛选出来的抑癌基因,是一种分泌型蛋白,可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,与病人良好预后呈正相关。我们前期研究表明,结肠癌细胞和成纤维细胞相互作用能促进结肠癌细胞IGFBP7表达,促进成纤维细胞活化。目前研究表明Wnt信号通路是结直肠癌发生发展的重要机制之一,那么这个信号通路是否参与了结肠癌细胞与成纤维细胞的相互作用并直接影响IGFBP7的表达?这正是我们的研究目标。本实验采用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting等方法,首先在肿瘤细胞和成纤维细胞相互作用模型(双层共培养和条件共培养细胞培养模型)中证实相互作用时肿瘤细胞IGFBP7表达升高。接着,通过分别加入Wnt通路的激动剂LiCl和抑制剂DKK-1模拟肿瘤细胞IGFBP7表达变化。结果发现加入LiCl后IGFBP7表达明显下调,加入DKK-1后IGFBP7表达明显上升。同时,我们采用相同的方法检测相互作用系统中Wnt信号通路相关靶基因如c-my和cyclinD1和相关蛋白如P-catenin和TCF4的表达变化,发现靶基因和相关蛋白的表达均降低。我们的实验结果表明结肠癌细胞和成纤维细胞相互作用中肿瘤细胞内Wnt信号通路受到抑制,并且在肿瘤细胞中的IGFBP7高表达受Wnt信号通路的负性调节。通过上述实验,我们得到以下结论:1.结肠癌细胞和成纤维细胞相互作用抑制肿瘤细胞Wnt信号通路;2.结肠癌细胞和成纤维细胞相互作用促进IGFBP7表达受Wnt信号通路负性调节。