小鼠Nlrp14基因是NLRs基因家族中的一员，NLRs家族在小鼠中包括34个成员。该基因家族在免疫细胞、上皮细胞等多种细胞胞质中表达，同时在卵母细胞、早期胚胎中也能够检测到其表达，在凋亡和炎症信号通路、生殖系统中发挥着至关重要的作用。近年来，研究人员发现Nlrp14在新生小鼠原始卵泡向初级卵泡的转变过程中表达明显升高，还有文章报道Nlrp14基因在精子发生中发挥作用，缺失会造成生精障碍，这说明Nlrp14极有可能在生殖细胞发育中扮演重要的角色，对于生殖机理的研究具有重要作用。基因打靶技术是一项非常重要的分子生物学技术，在基因功能探索，人类疾病研究，动物模型建立，基因调控机理探究，生物品种改造与培育等诸多方面具有广泛的应用。该技术根据定点同源重组原理，将与受体细胞染色体DNA具有同源序列的外源DNA整合到预定位点上，从而改变基因组中某一特定基因结构，使基因表达发生变化，从整体水平研究该基因的生理功能。目前采用小鼠胚胎干细胞进行基因打靶已经成为研究哺乳动物基因功能的重要手段。本研究采用同源重组基因打靶技术，构建打靶载体，转染小鼠胚胎干细胞，筛选获得阳性克隆，制作嵌合体胚胎，获得了Nlrp14基因敲除的嵌合体小鼠模型，为长期的、动态研究Nlrp14基因在小鼠性腺发育及生殖细胞形成中的作用和机制创造了条件，同时也为生殖障碍相关基因的研究做出相应贡献。本研究的主要方法为，在Nlrp14基因外显子上、下游分别设计长臂和短臂，PCR方法克隆长臂和短臂，构建同源重组型打靶载体并转染小鼠ES细胞，经G418筛选，挑取阳性克隆，PCR方法鉴定同源重组ES细胞克隆。将成功打靶的细胞进行嵌合鼠的实验，对所得到的嵌合鼠进行鉴定，为下一步建立Nlrp14缺失型小鼠并为从整体水平研究Nlrp14基因的生理功能奠定基础。