【摘 要】
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本研究以欧美杨107茎段为材料,建立高效组培再生体系,确立了适宜的茎段再生不定芽的培养基和生根培养基。采用根癌农杆菌介导法,将拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+ antiporter)基因
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本研究以欧美杨107茎段为材料,建立高效组培再生体系,确立了适宜的茎段再生不定芽的培养基和生根培养基。采用根癌农杆菌介导法,将拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+ antiporter)基因(AtNHX1)首次转入杨树,并进行了功能验证。本实验研究得出茎段分化的最适培养基为MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1NAA,分化率为100%,这为遗传转化工作提供了坚实的基础。遗传转化过程中卡那霉素作为遗传转化的筛选剂,它的最佳浓度为70 mg·L-1;农杆菌LBA4404的最适浓度是OD600=0.5,侵染10~15 min;外植体预培养2 d,共培养2 d。对再生植株进行PCR检测、PCR产物基因测序和杨树基因组DNA的Southern检测,证实已获得126株转AtNHX1基因的杨树植株。转基因植株的功能验证表明,在不同浓度的NaCl的处理下,植物的净光合速率、蒸腾速率、叶绿素荧光、均呈下降趋势,但是植株的转基因植株下降的速率要明显小于非转化植株。在盐处理下,非转化植株的细胞膜透性要强于转化植株,其根和叶片中的Na+含量也高于转基因植株。
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