核仁(nucleolus)是普遍存在于真核细胞中的最重要结构。它是rDNA转录和糖体RNA的合成场所。如果说核糖体是合成蛋白质的“分子机器”，那么核仁是制造这一机器的“母机”。此外，核仁还具有另外的功能，包括一些小RNAs核苷酸修饰，在信号识别颗粒的生物合成中,尤其在细胞周期以及细胞衰老等程中,可能发挥举足轻重的作用。国内外学者发现，核仁蛋白在恶性肿瘤中所演的角色比较重要。而PES1（又名pescadillo）是核仁蛋白的一种基因，该物在斑马鱼胚胎发育的突变研究时被鉴现。PES1已知的生物学功能主要包括参核仁生成和调控细胞周期,还有研究提示PES1与肿瘤的的发生发展密不可分。本课题探讨在乳腺癌发生发展中,外源性雌激素对核仁蛋白PES1的调节机及PES1与ER-ɑ之间的相关性。第一部分，我们对实验室现有的几种妇科肿瘤细胞系通过蛋白印迹法Western blot）的方法检测其PES1的表达情况。同时，用免疫细胞化学和免疫光检测认定PES1定位于乳腺癌细胞核内。第二部分，乳腺癌细胞中加入外源性雌激素后，利用Western Blot技术检测核仁蛋白PES1的蛋白水平上调，且呈量效或时效变化，尤以乳腺癌细胞BICR ZR75最为明显。随即，在ER-ɑ（+）细胞系BICR和ZR75中分别敲低ER-ɑ，建ER相对表达较低的环境，监测雌激素刺激后PES1的表达水平。通过Westernlot技术鉴定不同干扰位点的干扰效率，分组给予雌激素（雌二醇，E2）刺激（溶对照、E2），24小时后收集新鲜细胞，采用Western Blot技术，比较上述细胞PES1的蛋白表达情况。结果表明：敲低乳腺癌细胞BICR和卵巢癌细胞SKOV3的ER-ɑ后，给予外源性雌激素刺激后，PES1的表达水平并没有上调。第三部分，为了研究ER-ɑ与PES1之间的关系，我们做了以下三方面的工。第一方面，在乳腺癌细胞BICR、ZR75和卵巢癌细胞系SKOV3中，通过瞬转染技术，敲低细胞中ER-ɑ，用Western Blot检测PES1的蛋白表达水平。发现：每当ER-ɑ水平敲低时，PES1也随即下调，而且在三种细胞中均有体现。相反，我们将乳腺癌细胞BICR的PES1敲低，发现ER-ɑ的水平也有所下调。正反两方面证明ER-ɑ与PES1有一定相关性。第二方面，为了验证ER对PES1的稳定性有无影响，敲低细胞BICR和ZR75中ER-ɑ，构建ER-ɑ相对表达较低的环境，分别在两个组（干扰ER和未干扰ER）中加入放线菌酮（Cycloheximide，缩写CHX），采用Western Blotting技术，以GAPDH为内参，比较上述细胞中PES1的表达情况。实验表明，在同一浓度CHX的作用下，两个组PES1随着时间的推移，均在逐步降解，但是干扰ER的实验组PES1降解会更快。尤其以乳腺癌细胞ZR75最为突出。第三方面，用免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）技术来检测细胞BICR中ER-ɑ与PES1之间的相互作用。结果提示：ER的抗体可以不同程度地使蛋白PES1沉淀，说明在乳腺癌细胞BICR中内源性ER和PES1可以相互作用。第四部分，我们对乳腺癌细胞中PES1的生物学功能进行初步研究。敲低乳腺癌细胞中的PES1后，做平板克隆形成实验和细胞周期的检测（流式细胞仪）。初步结果显示，PES1可以降低细胞的平板克隆形成能力。同时，PES1对细胞周期有一定影响，但作用不是很明显。因此，PES1的生物学功能需要进一步探讨。综上所述，雌激素可以通过其受体ER-ɑ来调节乳腺癌细胞中的核仁蛋白PES1，而且，在PES1降解的过程中，ER与PES1相互作用，可以延缓PES1的降解速度，对其稳定性起到一定作用。在生物学功能方面，初步显示，PES1降低细胞的平板克隆形成能力。总之，核仁蛋白PES1在乳腺癌的发生发展中可能扮演了重要的角色。