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目的①研究大鼠全脑缺血再灌注模型不同时间点凋亡相关蛋白核磷蛋白(NPM)在海马的表达;②缺血再灌注后应用Cystamine(CYS)对核磷蛋白表达水平的影响;③从而探讨全脑缺血时Cystamine保护脑组织的可能机制。材料和方法采用4血管阻断法制作大鼠全脑缺血模型,脑电图验证成功与否。78只成年雄性SD大鼠(模型成功率75%,死亡后补充动物),体重280-320g,随机分为假手术组(sham)、全脑缺血组(GI)、全脑缺血+Cystamine治疗组(GI+CYS)3组,其中Sham组6只,GI组、GI+CYS组各36只。GI组和GI+CYS组各按照再灌注后6小时、12小时、1天、3天、5天和7天随机分为6亚组,每亚组6只大鼠。其中GI+CYS组于双侧颈总动脉夹闭10分钟后立即给予CYS(150mg/kg)腹腔注射,缺血时间在24小时内的只在缺血后给予一次CYS (150mg/kg)腹腔注射,超过1天的每天在初次注射的相应时间点再各给予CYS (150mg/kg/day)腹腔注射。Sham组仅暴露两侧椎动脉及颈总动脉,不予电凝及夹闭,每天给予生理盐水1ml腹腔注射,于第3天处死。GI组每天给予等剂量生理盐水腹腔注射。将GI组和GI+CYS组大鼠分别在相应时间点,麻醉后断头取脑的海马组织。蛋白免疫印迹方法检测再灌注后不同时间点海马核磷蛋白表达水平的变化。使用ImageJ分析电泳条带灰度比。所有数据均采用均数±标准差(x±s)的形式表示,数据用SPSS11.5软件包做统计分析,检验水准a=0.05。结果蛋白免疫印迹(WESTERN BLOT):应用抗NPM的抗体对经SDS-PAGE并转膜的样品进行免疫检测,应用化学发光法(ECL)进行显色后在分子量37kD附近得到1条单一蛋白条带。Sham组海马有一定数量的NPM表达;GI组再灌注6小时后,海马NPM的表达较Sham组减弱,12小时后海马NPM表达增加,1天达高峰,后逐渐下降,3天、5天保持较高的水平;GI组与Sham组比较其1天、3天、5天亚组的NPM表达均明显升高,NPM条带相对较深,具有统计学意义(P<0.05);GI+CYS组再灌注6小时后,NPM表达水平即开始升高,12小时后NPM的表达开始明显增加,也在1天达高峰,后虽呈下降趋势,但再灌注7天仍维持在较高水平;仍高于假手术组;与GI组相比,1天、3天、5天、7天亚组NPM的表达显著升高,NPM条带较深,具有统计学意义(P<0.05),12小时亚组NPM的表达水平略高于GI组,NPM条带相对较深,计算无统计学意义(P>0.05)的表达。内参B—Actin(42 kD)显示Sham组,GI组与GI+CYS组的上样量无显著差异。结论全脑缺血急性期缺氧诱导NPM表达上调,启动细胞内信号传递途径,从而产生相应的效应分子对神经元起保护作用。在全脑缺血损伤急性期应用Cvstamine治疗,能够显著增加全脑缺血后海马NPM的表达,这可能是CYS在脑缺血性损伤中的神经保护机制之一。