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目的研究全长脂联素(Acrp30)在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、自噬、凋亡中的作用,并探讨自噬与脂联素诱导的凋亡之间的关系。方法1.体外培养MCF-7细胞,分为对照组(未加Acrp30)细胞,加入Acrp30组(Acrp30浓度分别为25、50、100、200 ng/ml),各组细胞进行常规培养。四亚基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞的OD490nm值及生长抑制率(%)=生长抑制率(%)=(OD对照组-ODAcrp30)/OD对照组×100%,了解细胞增殖情况;根据MTT结果,选取最适全长Acrp30干预浓度为100ng/ml。2.将乳腺癌细胞分为对照组,Acrp30组(加100 ng/ml Acrp30),分别常规培养0,24,48,72h,倒置显微镜观察两组细胞生长情况,包括细胞形态、贴壁、汇合率等;划痕试验了解细胞迁移能力;Western blot法检测LC3-II、LC3-I蛋白的表达情况评价细胞自噬水平;3.常规培养MCF-7细胞,分为对照组,3-MA组(加入3-MA即3-甲基腺嘌呤浓度为2mmol/l),Acrp30组(加100 ng/ml Acrp30),3-MA+Acrp 30组(2mmol/l 3-MA预先处理细胞1h后再加入100ng/ml Acrp30),培养0、24、48、72h,Annexin V-FITC染色结合细胞,流式细胞仪检测不同时间点各组细胞的总凋亡率情况,培养24小时行Western blot法检测LC3II与LC3I蛋白的表达情况。结果1.1 MTT结果显示:OD490nm值方面:培养24h时各组细胞OD490nm值无明显差异(P>0.05);48h后,各组细胞OD490nm值随着Acrp30浓度的增加,逐渐下降,但差异无统计学意义(P>0.05);72h后,与对照组相比,50、100、200 ng/ml Acrp30组OD490nm值显著降低(P<0.05),而100ng/ml Acrp30与加200ng/ml Acrp30组OD490nm值无明显统计学意义(P>0.05)。1.2各组细胞的生长抑制率:各组细胞24h生长抑制率无明显差异(P>0.05);培养48h后,与对照组和25ng/ml组相比,200ng/ml组生长抑制率明显增高(P<0.05),但是200ng/ml Acrp30组与100ng/ml Acrp30组无明显差异(P>0.05);培养72h后,与对照组相比,100、200ng/ml Acrp30组生长抑制率明显高于对照组(P<0.05),而100ng/ml Acrp30与200ng/ml Acrp30组细胞的生长抑制率无明显差异(P>0.05)。(2)倒置显微镜观察细胞生长情况:随着培养时间的延长,100ng/ml Acrp30组培养72h时,细胞对照组汇合率降低,细胞贴壁欠好,细胞形态成不规则形,培养液中可见大量漂浮的细胞。(3)划痕抑制实验结果显示:与对照组相比,24 h Acrp30组细胞爬行距离差异无显著性(P>0.05),48 h、72 h Acrp30组爬行距离明显减少(P<0.01);(4)Western blot结果:与对照组相比,Acrp30组LC3-II/LC3-I比值24、48 h显著提高(P<0.05),72 h有所升高但无统计学意义(P>0.05);(5)流式细胞仪检测凋亡率及western blot结果显示:培养24h,各组凋亡率无明显差异(P>0.05);培养48h时,与对照组及3-MA组相比,Acrp30组和3-MA+Acrp30组总凋亡率明显增加(P<0.01),而Acrp30组与3-MA+Acrp 30组总凋亡率无明显差异;培养72h时,与对照组及3-MA组相比,Acrp30组和3-MA+Acrp 30组总凋亡率明显增加(P<0.05),与Acrp30组相比,3-MA+Acrp 30组总凋亡率显著升高(P<0.05),3-MA组总凋亡率略高于对照组,但差异无明显统计学意义(P>0.05);24h western blot结果提示,与对照组相比,3-MA组LC3II/LC3I有所下降,但无统计学意义(P>0.05),Acrp30组和3-MA+Acrp 30组LC3II/LC3I明显升高(P<0.05);与Acrp 30组相比3-MA+Acrp 30组LC3II/LC3I明显升高(P<0.01);结论(1)Acrp30可抑制MCF-7细胞的增殖和迁移,诱导细胞的自噬和凋亡;(2)抑制细胞自噬可促进Acrp30对MCF-7细胞凋亡的诱导。