拟南芥CKL-3基因T-DNA插入突变体功能分析

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酪蛋白激酶(casein kinase)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,在物种间和组织分布的很广泛,包括了CK1和CK2两大亚类。它是通过蛋白磷酸化而改变其活性的一类激酶。蛋白质磷酸化是生物体内蛋白质功能调节的重要方式。由于编码激酶/磷酸酶的基因之间存在功能重叠现象,大多数磷酸酶的功能以及蛋白磷酸化与信号传导途径的联系目前还不清楚。在生物生长发育过程中CK参与多种细胞功能及发育过程的调节,具有非常重要的作用。目前,已有对CKL2蛋白激酶在拟南芥中控制植物生物钟的报道。对于CK1类蛋白功能分析却不是很多,CKL-3基因属于CK1类蛋白,我们从拟南芥中克隆了一个酪蛋白激酶基因CKL-3。本文对CKL-3的表达以及生物学功能进行了如下初步研究:1.在本文中,根据www.arabidopsis.org网站提供的基因组序列,得到了CKL-3的翻译起始密码子上游3219bp的片段。通过www.arabidopsis.org网站,我们能得到CKL-3的基因组序列,然后利用植物启动子顺式作用元件分析网站plantCARE分析得到大量与光相关的调控元件和与胁迫诱导相关的元件,最后通过基因芯片查出CKL-3在植物不同组织的表达。CKL-3基因在花中表达量最高,其次是根,在叶和叶柄中表达量较弱。基因芯片分析的结果后续研究奠定了基础。2.我们采用双引物法筛选出纯合子,并用半定量PCR对其进行了鉴定。通过提取RNA定量测定它在成年植株中CKL-3基因的表达水平,发现与基因芯片的预测相符合。同时我们还考察了CKL-3基因的缺失对相关ABA及胁迫信号途径相关基因表达量的影响。对CKL-3T-DNA纯合突变体和野生型用不同浓度ABA(0,0.1,0.15,0.3uM)的处理后,发现突变体比野生型对胁迫处理较为不敏感。
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