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基因沉默技术，即19-25个碱基的双链小干扰RNA(siRNA)，特异高效地切断靶mRNA从而抑制基因表达，它的发现开启了基因功能研究和疾病治疗新时代。随着基因沉默技术在生物学和疾病治疗应用中的快速发展，化学修饰的siRNA合成越来越受科学家关注。而应用最广泛的修饰siRNA的合成方法是修饰核苷单体的固相合成法，由于化学修饰单体原料难于合成和合成条件苛刻等原因制约了新修饰siRNA的合成。为拓展基于沉默技术应用，合成新化学修饰的siRNA，论文基于“点击”化学，系统开展了小分子与RNA分子连接的方法研究。 论文开展了一系列小分子与RNA“点击”反应研究，以疏水性胆固醇叠氮基衍生物和亲水性三甘醇叠氮基衍生物同亲水性5-乙炔基尿嘧啶核苷在不同反应体系中进行“点击”反应。研究结果表明:在各类溶剂体系中，炔基和叠氮基化合物均具备良好溶解性即可获得较高“点击”反应效率。亚铜离子稳定剂或络合物的加入提高了“点击”反应产率促进反应。结论:反应底物溶解能力决定了“点击”反应能力，亚铜离子稳定剂或亚铜离子络合物能促进“点击”反应效率。 论文合成了末端和中间修饰炔基修饰RNA亚磷酰胺单体，以RNA固相合成方法将炔基引入RNA末端和/或插入中间。以末端炔基修饰RNA体系研究了不同反应条件下小分子与RNA的“点击”反应，包括:RNA完全脱保护后，RNA固相合成后，在RNA脱碱基的氨水/乙醇环境中或RNA脱2-O-TBDMS基的四丁基氟化铵(TBAF)/四氢呋喃(THF)环境中，进行“点击”反应。论文创新性的开发出“一步法”RNA分子连接方法，即在RNA脱保护过程中同时完成RNA与小分子的连接反应。新方法减少了RNA分子连接操作流程，降低了RNA分解风险，此法操作简便，适合高通量合成修饰siRNA，为RNA功能修饰分子奠定了技术基础。论文以此方法合成了荧光标记、聚乙二醇、胆固醇和胆酸修饰siRNA，初步生物活性测试结果表明，“点击”化学连接方法，不影响siRNA基因沉默效果。