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1研究目的研究细胞凋亡在三氯乙烯对BALB/c裸鼠皮肤组织损伤中的作用,并通过检测细胞凋亡的相关指标,探讨细胞凋亡的信号传导通路,通过研究维生素E和银杏叶提取物的保护作用,探讨TCE引起皮肤组织细胞凋亡的发生机理,为防治职业性ICD提供新的思路和科学的理论依据。2研究方法从上海斯莱克实验动物有限责任公司购进成年雌性BALB/c裸鼠,随机分成空白对照组、溶剂对照组(橄榄油)、10%TCE、20%TCE、40%TCE、80%TCE和100%TCE剂量组以及5%、10%、20%维生素E和0.1%、1%和10%银杏叶提取物剂量组,将100ul不同浓度的TCE和溶剂对照涂到2.5cm×2.5cm大小背侧皮肤上,保护作用研究是先将100ul不同浓度的维生素E和GbE涂到裸鼠背部皮肤上,1h后再将100ul 100%TCE涂到同样的皮肤位置,敷用时间为每次4h,试验结束后用生理盐水除去残留受试物,染毒24小时。染毒结束后将裸鼠背部皮肤迅速取下,经固定、脱水、包埋、切片后用日本产JEM-1230型透射电镜观察摄片。并取部分组织进行石蜡包埋,应用TUNEL法检测裸鼠皮肤组织的细胞凋亡,应用免疫组织化学方法检测皮肤组织中caspase-3、caspase-8、caspase-9、cytc和AIF的含量,并研究抗氧化剂维生素E和银杏叶提取物的保护作用。3结果(1)电子显微镜下观察发现在急性刺激试验中100%TCE剂量组的皮肤角质形成细胞胞浆中的线粒体出现肿胀及空泡变,细胞核体积缩小,TUNEL法检测细胞凋亡发现,低剂量组凋亡指数低,高剂量组凋亡指数高,各组间caspase-3含量的差异有统计学意义,低剂量组含量少,高剂量组含量高。(2)通过免疫组化的方法检测皮肤组织内caspase-9和cytc的含量发现各组间的差异有显著性,低剂量组含量较低,10%TCE剂量组与溶剂组之间无差异,其他剂量组的活性较高,cytc的含量在40%TCE剂量组含量最高。(3)免疫组化检测皮肤组织内caspase-8的含量发现,各剂量组间的差异无统计学意义,caspase-8活化水平较低。(4)免疫组化检测皮肤组织内AIF的含量发现10%TCE剂量组与溶剂组的无差异,高剂量组与溶剂对照组相比有差异,且有统计学意义。(5)经不同浓度的VE和GbE处理后的皮肤组织内的细胞凋亡指数、cytc和AIF以及caspase-9的含量有所下降,且呈现出剂量-效应关系,高剂量组有一定的保护作用。4结论1、TCE在一定浓度下可以引起皮肤组织的细胞凋亡,细胞凋亡在TCE致裸鼠皮肤组织的损伤中具有重要的意义。2、TCE所致皮肤组织角质形成细胞的凋亡主要是通过线粒体途径引起的。3、VE和GbE能有效地降低TCE诱导的皮肤表皮组织的细胞凋亡,抑制TCE所致的皮肤损伤。