磷脂酰胆碱 (phosphatidylcholine，PC) 也称卵磷脂 (lecithin)。系统名称为 1，2-二酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1，2-diacyl-sn-glycero-3-phosphocholine)。诸多实验结果已经证明，PC 不但参与维持生物膜正常的结构和功能，与细胞的生长、增殖、分化及癌变密切相关，其降解产物还参与细胞的信号转导和代谢调控，具有防衰老、降血脂、健脑、保肝、抗肿瘤等多种生理作用。缩醛磷脂酰胆碱 (plasmanylcholine，plas-PC) 属于PC中的一类较为特殊的分子种，是一族醚甘油酯，结构中甘油骨架 sn-1 位置上含顺-α，β-不饱和醚(0-顺-α，β-烯醚键)(vinyl ether bond)，主要存在于某些动物组织和单细胞生物中。它们是真核生物细胞膜的重要组分之一，其含量因组织细胞的特异性不同而有所不同。Plas-PC具有诸如介导细胞的融合，参与离子跨膜转运及胆固醇的运输，作为细胞第二信使的储存库等重要的生物学功能，其抗氧化和抗癌作用已经越来越受到了人们广泛的关注。 我们实验室前期的研究表明，肝中催磷脂酰乙醇胺(phosptlatidylethanolamine，PE)甲基化生成PC的磷脂酰乙醇胺甲基转移酶(PEMT) 过表达能显著抑制肝癌细胞的生长并诱发凋亡，提示肝源PC可能具有抑制细胞增殖的作用。为了进一步研究肝源性磷脂酰胆碱的生理作用，开发其保健和医疗功效，本文重点研究了肝源性卵磷脂的工业化分离纯化方法和流程，分析了肝源性卵磷脂及其特异的缩醛卵磷脂分子种的结构，探讨了其可能的生物学功能。 首先，建立了氧化铝柱色谱分离肝脏PC的简易方法。通过实验我们首次证明，以95％乙醇洗脱φ15mm的Al<,2>O<,3>色谱柱，可以实现肝脏磷脂诸多成分的分离，尤其是肝源性PC与PE的完全分离，并且在初步优化的实验室放大工艺条件下也达到了理想的分离效果，得到的PC纯度达到90％以上，为PC的工业化生产提供了技术支持。 其次，利用MTT法测定了 12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L PC及plas-PC对大鼠肝癌CBRH-7919细胞增殖的影响并与人白血病K562细胞作了比较。结果表明：(1) 肝源PC及plas-PC对大鼠肝癌CBRH-7919细胞的抑制作用明显高于K562细胞，并且存在时间剂量依赖关系；(2)由柱色谱获得的肝源PC对癌细胞的增殖抑制作用具有组织特异性，并且对特异癌细胞的增殖抑制存在时间剂量依赖性。 第三，建立了反相高效液相色谱法(reversed-phase high performanceliquid chromatography，RP-HPLC)分离纯化肝源PC分子种的有效方法。考察了流动相中有机溶剂的种类、配比及流速对分离肝源性PC的影响。研究发现，在以甲醇为主的流动相中加入正己烷和醋酸铵有利于肝源性PC分子种的分离；甲醇—乙腈—水梯度洗脱不适于分离肝源性PC分子种。结果表明，采用KromasilC18色谱柱(4.6mm×200mm，i．d．，5 μm)，以甲醇—正己烷—0.05mol/L醋酸铵—甘油(84∶6∶8∶0.6，体积比)为流动相，在流速1.0ml/min、检测波长206nm、柱温35℃的条件下，实现了肝源性PC各组分的分离。所建立的方法灵敏，重复性高，为进一步采用液质连用技术研究肝源性PC不同分子种的结构奠定基础。第四，根据HPLC的分离结果，进一步对plas-PC的结构进行了鉴定。首先采用上述分离系统运用标准品初步确定plas-PC的保留时间为19.11min；然后收集肝脏plas-PC进行红外检测；最后采用Quattro Micro Tandem MS/MS系统对plas-PC进行ESI+分析，结果表明：采用以下实验条件，毛细管电压：3.00kV，锥孔电压：25V，离子源温度：120℃，脱溶剂气温度：350℃，质量范围：100～1000m/z，光电倍增器电压：650V，锥孔气体流速：0.83 L/min，溶解气体流速：6.7L/min，获得了plas-PC准确的分子结构信息。结果提示，本实验分析的肝脏plas-PC分子量为794Da，结构为sn1-18∶0 (0-烃基)，sn2-20∶4(0-酰基)。 通过实验结论： (1)通过柱色谱法获得的肝源性磷脂酰胆碱，纯度可以达到90％以上； (2)肝源性PC能够显著抑制肝癌细胞的增殖； (3)肝源性PC的重要成份Plas-PC的分子量为794Da，sn1-18∶0(0-烃基)，sn2-20∶4(0-酰基)。