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目的:研究肠道益生菌VSL#3对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法:通过饲养C57BL/6小鼠,选取6-8周龄健康的雄性小鼠,建立四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型,采用HE染色、天狼星红染色、蛋白免疫印迹(Western blot)检测分析CCl4处理小鼠后肝组织的情况;通过Western blot分析小鼠肝纤维化模型中Stat3通路的活化情况;实验设计分组为ctl组(橄榄油对照组),Stattic组,CCl4组,Stattic+CCl4组(Stattic为Stat3抑制剂),每组6只小鼠,CCl4腹腔注射处理小鼠,每周3次,每次剂量为4 m L/kg,对照组给予等量的橄榄油腹腔注射小鼠,同时Stattic腹腔注射处理小鼠,每天1次,每次剂量为3mg/kg,持续给药4周后处死小鼠收集肝脏标本。采用天狼星红染色检测分析Stattic对CCl4诱导的小鼠肝脏损伤的影响。实验设计分组为ctl组,VSL#3组,CCl4组,VSL#3+CCl4组,每组6只小鼠,CCl4腹腔注射处理小鼠,每周3次,每次剂量为4 m L/kg,对照组给予等量的橄榄油腹腔注射,同时益生菌VSL#3灌胃处理小鼠,每天1次,每次剂量为0.6g/Kg,持续给药4周后采集小鼠眼底静脉血清及肝脏标本。采用HE染色和血清转氨酶(AST和ALT)检测分析益生菌VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝脏损伤的影响;采用天狼星红染色、Western blot检测分析肠道益生菌VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响;采用Western blot检测分析肠道益生菌VSL#3对CCl4诱导的小鼠肝纤维化组织中Stat3通路的影响。结果:(1)CCl4能够有效诱导小鼠肝纤维化:通过HE染色结果显示CCl4处理小鼠后肝组织中出现较多的空泡样与结节性坏死。这就提示CCl4诱导了小鼠肝组织损伤。此外,通过天狼星红染色结果显示CCl4处理小鼠后肝脏组织出现胶原纤维堆积。同样,Western blot结果显示CCl4处理小鼠后肝脏组织中α-SMA明显上调。因此,这些结果证实了CCl4能够有效诱导小鼠肝纤维化(2)Stat3在小鼠肝纤维化模型中活化:Western blot结果显示在CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中Stat3的磷酸化水平比对照组肝组织显著上调。这就提示CCl4诱导了小鼠肝组织Stat3的活化,证实了Stat3信号通路在小鼠肝纤维化中处于活化状态(3)抑制Stat3可以缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化:天狼星红染色结果显示Stattic+CCl4组的胶原纤维堆积比单独CCl4组显著减少。这就提示Stattic抑制了肝纤维化。此外,Western blot结果表明Stattic+CCl4组比单独CCl4组的肝星状细胞标记分子α-SMA明显下调。因此,这些结果证实了抑制Stat3能够缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化。(4)VSL#3能够缓解CCl4诱导的小鼠肝脏的损伤:HE染色结果表明VSL#3能够有效减少肝组织发生空泡样和结节性坏死。这就提示VSL#3缓解了CCl4诱导的小鼠肝损伤。此外,血清学肝功能指标表明VSL#3+CCl4组的AST和ALT比单独CCl4组显著下降,与上述结果一致。从而证实了VSL#3能够缓解CCl4诱导的小鼠肝损伤;(5)VSL#3抑制了CCl4诱导的小鼠肝纤维化:天狼星红染色结果表明VSL#3+CCl4组的胶原纤维堆积比单独CCl4组显著减少。这就提示VSL#3缓解了CCl4诱导的小鼠肝纤维化。此外,Western blot结果表明VSL#3+CCl4组比单独CCl4组的肝星状细胞标记分子α-SMA明显下调,与上述结果一致。从而证实了VSL#3抑制CCl4诱导的小鼠肝纤维的堆积;(6)益生菌抑制CCl4诱导的小鼠肝脏Stat3的活化:Western blot结果表明VSL#3+CCl4组的Stat3的磷酸化比单独CCl4组明显下调。这就提示益生菌抑制CCl4诱导的肝组织Stat3通路活化。结论:1、CCl4能够有效诱导小鼠肝纤维化;2、Stat3在小鼠肝纤维化模型中活化;3、抑制Stat3可以缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化;4、益生菌抑制CCl4诱导小鼠肝纤维化;5、益生菌通过抑制Stat3的活化抑制CCl4诱导小鼠肝纤维化。