目的:　　 Dicer是一种核糖核酸内切酶，它在siRNA及microRNA的形成过程中起重要作用。我们前期工作发现Dicer将7SL RNA切割成约20至200个以上核苷酸的长度不等的片段。7SL RNA是信号识别颗粒(signal recognition partical，SRP)的组成成分之一。SRP由7SL RNA和6条不同分子量的多肽链结合组成。SRP能够识别并结合刚从游离核糖体上生成的信号肽，且能将与mRNA结合的核糖体带到内质网膜上参与蛋白合成。本课题旨在研究Dicer切割7SL RNA生成的片段对SRP复合体的形成及功能的影响。　　 方法:　　 1、过表达Dicer切割7SL RNA生成的小片段产物7SL sRNA5cd，用碱性磷酸酶实验检测7SL sRNA5cd对报告基因分泌型碱性磷酸酶(SEAP)表达的影响;用荧光显微技术检测报告基因融合蛋白ECFP-ER的表达水平;并用流式细胞技术检测细胞表面糖蛋白的表达水平。　　 2、克隆Di cer切割生成的7SL RNA片段，验证RNA测序的结果。过表达7SL RNA长片段，包括7SL(1-96)，7SL(1-212)和7SL(97-299)，分别检测其对SEAP的活性、ECFP-ER蛋白表达水平及细胞表面糖蛋白表达水平的影响。在体外将细胞裂解液与7SL RNA片段孵育，通过甘油密度梯度离心技术分离细胞蛋白组分，并用Real time PCR检测全长7SL RNA、用western blot检测SRP亚基在各组分中的相对表达量。　　 3、在HepG2.2.15和HEK293T细胞中，先用RNAi技术抑制Dicer的表达，然后检测SEAP报告基因、ECFP-ER报告蛋白及细胞表面糖蛋白的表达水平。并在其他细胞系如T29细胞、HCT116细胞和RKO细胞中验证。　　 4、在下调Dicer的细胞中，转染7SL RNA长片段的混合物，包括7SL(1-96)，7SL(1-212)和7SL(97-299)，检测SEAP活性、ECFP-ER蛋白表达及细胞表面糖蛋白的表达水平。　　 5、在下调Dicer的细胞中，用Real time PCR和western blot分别在mRNA和蛋白水平分析Dicer表达降低对SRP亚基表达的影响。　　 结果:　　 1、过表达7SL sRNA5cd对SEAP、ECFP-ER蛋白及细胞表面糖蛋白的表达没有显著影响。　　 2、过表达7SL RNA的长片段[如7SL(1-96)，7SL(1-212)和7SL(97-299)]后，SEAP的分泌、ECFP-ER蛋白的表达及细胞表面糖蛋白的表达受到显著抑制。且7SL RNA长片段影响SRP复合物的形成。　　 3、在HepG2.2.15和HEK293T细胞中抑制Dicer表达后，SEAP分泌显著增加，融合蛋白ECFP-ER和细胞表面糖蛋白的表达也增加。在其他细胞系如T29细胞、HCT116细胞和RKO细胞中得到同样的结果。　　 4、在Dicer受抑制的细胞中，转染7SLRNA片段的混合物，SEAP的分泌受到部分抑制，ECFP-ER和细胞表面的糖蛋白的表达也得到部分恢复，转染对照LaeZ RNA后没有检测到明显变化。　　 5、转染siRNA抑制Dicer的表达后，7SL RNA的表达量没有明显变化，SRP亚基在mRNA水平和蛋白水平的表达也没有明显变化。　　 结论:　　 1、7SLRNA受Dicer切割衍生的小片段7SL sRNA5cd对SRP介导的蛋白转运没有产生影响。　　 2、Dicer切割产生的7SLRNA长片段抑制SRP介导的蛋白转运和SRP复合物的形成。　　 3、抑制Dicer的表达导致SRP介导的蛋白转运增强，且Dicer对SRP介导的蛋白转运的影响不具有细胞特异性。　　 4、下调Dicer后对SRP功能的影响不是因7SLRNA表达下降引起的，Dicer的抑制也不影响SRP亚基的表达水平。