对虾白斑综合症病毒特异性卵黄免疫球蛋白的制备及性能研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaimeng2
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对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV)是目前危害对虾养殖业最为严重的病害之一,在世界范围内已造成了巨大经济损失,目前尚未得到有效的防治。因此,寻找一种安全、高效的抗WSSV方法已成为亟待解决的问题。卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin, IgY)可用于治疗由细菌或病毒等多种病原体引起的人类及动物疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,在防治水产动物疾病方面,具有广阔的应用前景。本研究分离了WSSV病毒,利用PCR技术分别钓取了WSSV的主要致病蛋白基因VP28、VP19、VP15,并设计两条连接肽,通过重叠PCR技术将三段基因串联并克隆至真核表达载体pCI,制备pCI-28-19-15三价核酸疫苗,并将其转染HeLa细胞表达融合蛋白,间接免疫荧光反应实验检测核酸疫苗的免疫原性。结果表明,三价基因在HeLa细胞中表达的融合蛋白能够特异性地识别抗WSSV血清,说明三价核酸疫苗具有较好的免疫原性。在此基础上,以三价核酸疫苗和WSSV病毒灭活疫苗为抗原免疫蛋鸡,制备抗WSSV特异性卵黄抗体,间接ELISA法检测抗体活性,并分析含多个胞嘧啶-鸟嘌呤(CpG)二核苷酸的寡核苷酸链(CpG oligodeoxynucleotides, CpG ODN)作为核酸疫苗佐剂在免疫过程中所发挥的效用。间接ELISA结果表明,免疫制备的IgY水溶组分和血清中的IgG均具有抗病毒活性,且灭活疫苗组及CpG佐剂组均与对照组差异显著,CpG佐剂能够显著增强核酸疫苗的免疫性能(P<0.05)。将制备的IgY蛋白粉和卵黄粉分别用于克氏螯虾体内攻毒保护试验,结果表明,注射WSSV-IgY及DNA-IgY与病毒的中和液,攻毒螯虾的死亡率分别为20%和80%。在口服被动免疫试验中,添加1%的WSSV-IgY蛋白粉和10%WSSV-卵黄粉的实验组,克氏螯虾的死亡率分别降低至53.3%和67.7%。而在浸泡被动免疫试验中,WSSV-IgY浸泡组的死亡率为26.7%。以上处理均与对照组呈显著性差异(P<0.05),表明将制备的特异性IgY被动免疫克氏螯虾,具有抗WSSV功效。综上,本研究制备的抗WSSV特异性IgY具有防治WSSV的功效,其作为一种新型的水产动物抗病毒免疫制剂,将具有良好的产业化前景。
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