蛇毒是毒蛇头部毒腺所分泌的有毒液体，它是一种生物毒素(biotoxin)。蛇毒中含有二十种以上的活性成分，其中主要成分为神经毒素、多肽和酶类等生物物质，因此蛇毒具有多种生物效应，尤其在神经系统和心血管系统方面。本实验室利用基因工程技术，从尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒腺中分离得到了一种蛇毒纤溶酶的cDNA序列。本论文运用生物信息学、分子生物学、蛋白质化学和生物化学等方法对这种新的蛇毒纤溶酶进行了研究，为蛇毒纤溶酶溶栓作用、结构与功能的研究及抗血栓新药的开发和利用奠定了基础。 应用生物信息学工具对蛇毒纤溶酶的氨基酸序列进行分析后发现，本论文所研究的蛇毒纤溶酶属于一种锌金属蛋白酶，与前人所报道的一个锌金属蛋白酶Reprolysin序列高度相似。 利用基因工程的手段，构建了蛇毒纤溶酶的表达质粒，在真核表达系统酵母菌中获得了高效表达。试验中通过离子交换和疏水层析，最终获得了高纯度的重组蛇毒纤溶因子。分析纯化的重组蛇毒纤溶因子的物理性质，发现通过激光飞行时间质谱测定的分子量与通过预测得到的分子量相差0.7kDa，推测可能跟翻译后的修饰有关。圆二色谱分析结果表明，纯化的重组蛇毒纤溶因子的二级结构中以α-螺旋(α-helix)和β-拐角(β-turn)为主，含部分无序(Random)结构，不含有β-折叠(β-sheet)。其二级结构的组成与天然提取的蛇毒纤溶酶的二级结构基本一致，说明通过重组表达得到的蛇毒纤溶因子的折叠是正确的。 在体外，利用酪蛋白、发色底物、Azocasein对重组的蛇毒纤溶因子rFⅡ进行了酶学性质的研究。结果表明，rFⅡ对发色底物N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys4-pNA的Km值是5.36×10-4mol/L，Kcat值是4.18×10-5s-1。酶反应的最佳温度和pH值分别是30-50℃和pH7.0-10.5。EDTA和PMSF均可抑制rFⅡ的蛋白水解活性。高浓度的铜离子和锌离子对rFⅡ的蛋白水解活性有抑制作用。rFⅡ对酪蛋白的水解呈时间和浓度依赖性的趋势。应用胰岛素氧化B链为底物检测rFⅡ的酶切位点，结果提示其酶切位点为Val12-Glu13、Leu15-Tyr16和Phe24-Phe25。 对基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ的体外溶栓作用研究表明，rFⅡ对纤溶酶原没有激活作用，rFⅡ可以水解纤维蛋白原和纤维蛋白的α链、β链、γ链，水解程度随作用时间和酶浓度的增加而增加；对纤维蛋白的酶切位点不同于纤溶酶。利用比浊法研究了rFⅡ对血小板聚集功能的影响，结果显示rFⅡ在体外可以抑制ADP诱导的人血小板聚集，抑制作用与rFⅡ之间存在着量效关系，50％的抑制浓度IC50为85.6μg/mL。 总之，重组蛇毒纤溶因子rFⅡ在真核表达系统中获得了高效的重组表达；纯化的rFⅡ的活性研究及其溶栓能力的研究对于阐明rFⅡ的酶学活性意义重大，同时也为开发一种新的治疗血栓性疾病的药物提供重要的参考数据。