第一部分研究背景和目的(KLKB1)原发性高血压(EH)是一种复杂的多基因疾病，环境因素与遗传因素都对疾病的发生起到有重要的作用。研究表明血压变异的30％-50％受到遗传因素的影响，而这些遗传因素包括多个基因的作用，每个基因的作用可能是微效的。目前研究血压调控和高血压发生过程中遗传因素的作用有多种方法，主要包括连锁研究和关联研究。由于连锁分析研究多个微效基因作用的常见复杂疾病存在着局限性，目前广泛采用关联研究来探索复杂疾病的易感基因。血浆激肽释放酶是激肽释放酶—激肽系统中的一个重要组成部分。它是一种丝氨酸蛋白酶，在肝脏中以激肽释放酶原的形式合成，然后分泌到血液中转化为血浆激肽释放酶。血浆激肽释放酶可以作用于高分子量的激肽原产生缓激肽并使肾素原转变为肾素。缓激肽是重要的舒张血管活性因子，而肾素可以使血管紧张素原转化为血管紧张素，因此血浆激肽释放酶通过调节这些活性物质，对血压的调节起到十分重要的作用。多项研究已经表明单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism，SNP)在基因内或整个基因组中的分布不是随机的，而是在一定范围内存在相关，即存在着连锁不平衡(linkage disequilibrium，LD)。国际HapMap计划构建了人类基因组单体型图谱，是一个很好的单体型数据库，它将成为研究者探索健康和疾病问题遗传学背景的有力工具。本研究基于HapMap计划中国人群(CHB)的数据，采用标签SNP方法在中国汉族原发性高血压病例—对照人群中对KLKB1基因多态进行了研究。材料和方法(KLKB1)本研究所有DNA样本和临床资料均来自亚洲国际心血管病协作研究(TheInternational Collaborative Study of Cardiovascular Disease in Asia，InterASIA)中国部分，研究对象包括北京、吉林、山东、陕西4个省市的1317名高血压患者(收缩压≥150mmHg和／或舒张压≥95mmHg和／或研究对象正在接受抗高血压药物治疗)和按照地区、性别和年龄匹配的1269名健康对照。排除了有继发性高血压、冠心病、糖尿病、脑卒中、严重肝肾疾病和恶性肿瘤患者。参加者均详细填写调查表，包括疾病个人史、家族史、吸烟与饮酒史和药物使用情况，并测量血压、身高、体重、腰围及臀围以及脂质水平等各项生化指标。所有研究对象均为汉族且无血缘关系。从HapMap网站下载KLKB1基因序列范围内的45个中国人的SNPs信息，选择常见SNP计算连锁不平衡状态并构建单体型，通过tagSNPs和htSNP2软件包选择标签SNP。使用PCR-RFLP方法对2586例研究对象进行基因型鉴定。t检验及x~2检验用于单变量分析，非条件Logistic回归分析用于检验多态位点与表型的独立关联及与环境因素的交互作用，以上分析过程由Stata 8.0来完成。应用Haplo．stats软件分析调整环境因素后单体型与表型的关联。Genasso用于预测其他未作基因分型的SNPs与原发性高血压的关联关系。结果(KLKB1)病例组和对照组的性别、年龄、吸烟率和饮酒率均无显著性差异。在HapMap数据库中，KLKB1基因区域内CHB人群共有8个常见SNPs，根据htSNP2和tagSNP程序的计算结果，选择rs2278542、rs2304595、rs4253325和rs925453做为标签SNP。单变量分析结果显示rs2304595和rs4253325与高血压的发生显著关联。与单个SNP分析结果一致，携带有rs2304595 G等位基因和rs4253325 A等位基因的两种单体型Hap1(AGAC)和Hap3(CGAC)显著增加了高血压发生的危险。与单体型Hap2(CAGC)相比，调整后的OR值分别为1.37(95％CI 1.29-1.45，P＜0.0001)和1.17(95％CI 1.02-1.34，P=0.028)。饮酒和基因之间存在着显著的交互作用，在饮酒人群中Hap1(AGAC)相对于Hap2(CAGC)的OR值增加为2.50(95％CI，2.40 to 2.61，P＜0.0001)．结论(KLKB1)本研究首次开展了KLKB1基因与高血压的关联研究，结果显示KLKB1基因的常见变异可能会增加中国北方汉族人群高血压发生的危险性。第二部分研究背景和目的(TERT)端粒酶(telomerase)是由端粒RNA和端粒逆转录酶(human telomerasereverse transcriptase，TERT)两个亚基组成的一种核酸蛋白复合物。它能以自身RNA为模板反转录合成端粒DNA序列，然后添加至染色体末端，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，使端粒延长，端粒功能得以恢复。成熟体细胞端粒酶活性缺乏或较低，因此随着减数分裂的增加，端粒会出现磨损而变短。在肿瘤细胞和生殖细胞中端粒酶的活性较高，因此其端粒的长度保持恒定，并有一定的增殖能力。端粒长度和端粒酶活性的变化与细胞衰老和癌变密切相关。同时越来越多的相关研究发现，原发性高血压、动脉粥样硬化、心力衰竭等心血管疾病发生发展过程中有端粒长度、端粒酶活性的相关变化。最近研究也显示端粒酶对血管平滑肌细胞的增殖和分化起到重要的调节作用。因此我们推测端粒酶的活性降低以及端粒的缩短通过影响血管内皮细胞引发血压升高。Perez-Rivero等最近发现敲除编码端粒RNA基因的大鼠将会诱发高血压。这一结果进一步说明端粒酶在高血压形成过程中起到重要的作用。研究证明TERT的调控主要是转录水平上的调控，TERT启动子对TRET的表达和端粒酶活性的上调起关键作用。最近发现启动子区rs2735940多态位点变异与启动子活性和端粒的长度相关，因此本研究把TERT基因启动子区作为研究的重点，在中国汉族人群中探索TERT基因启动子区多态变异与高血压发生的关系。材料和方法(TERT)本研究所有DNA样本和临床资料均来自InterASIA研究中国部分，研究对象包括北京、吉林、山东、陕西4个省市的1317名高血压患者(收缩压≥150mmHg和／或舒张压≥95mmHg和／或研究对象正在接受抗高血压药物治疗)和按照地区、性别和年龄匹配的1269名健康对照。研究对象排除了有继发性高血压、冠心病、糖尿病、脑卒中、严重肝肾疾病和恶性肿瘤患者。参加者均详细填写调查表，包括疾病个人史、家族史、吸烟与饮酒史和药物使用情况，并测量血压、身高、体重、腰围及臀围以及脂质水平等各项生化指标。选择TERT基因启动子区2个多态位点rs2736109和rs2735940，使用PCR-RFLP方法对2586例研究对象进行基因型鉴定。t检验及x~2检验用于单变量分析，非条件Logistic回归分析用于检验多态位点与表型的独立关联及与环境因素的交互作用，以上分析过程由Stata8.0来完成。应用Haplo．stats软件分析调整环境因素后单体型与表型的关联。所有检验都为双侧检验。结果(TERT)病例组和对照组的性别、年龄、吸烟率和饮酒率均无显著性差异。两个位点的基因型分布在总体、病例和对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡。rs2736109和rs2735940的基因型分布在病例和对照中差异均无显著性(rs2736109：P=0.794；rs2735940：P=0.390)。rs2736109和rs2735940两个多态位点之间连锁不平衡程度较强(D’=0.823，r~2=0.371)。单体型研究结果显示在调整其它环境因素后，Hap1携带者发生高血压的危险性比Hap3携带者显著降低(OR=0.79，95％CI 0.78-0.80，P＜0.0001)。结论(TERT)本研究首次探索了TERT基因与高血压发生的关联关系，发现多态位点rs2736109和rs2735940构成的单体型AC对高血压的发生有一定的保护作用。但结果的稳定性还需要在其它独立研究中证实。