论文部分内容阅读
目的:评估miR-126在不同肾组织和不同肾细胞株之间的表达差异，初步判断miR-126在肾癌的发生和进展中可能扮演的角色，同时，构建miR-126过表达和敲低质粒为后续的功能研究做准备。
方法:收集中国人民解放军总医院17例配对的肾透明细胞癌与癌旁组织标本，22例转移性透明细胞肾细胞癌组织标本，培养正常人肾近曲小管上皮细胞株HKC以及肾透明细胞癌细胞株786-O、769P、Caki-1、ACHN、SN12-PM6。逆转录miR-126为cDNA模板，荧光定量PCR采用SYBER Green染料法比较Ct值。构建miR-126过表达质粒(pIRES2-EGFP-miR-126-over)和miR-126敲低质粒(pIRES2-EGFP-miR-126-sponge)使用转染试剂转染入293T细胞内验证其效能。
结果:miR-126在局限性肾癌组织中的表达与癌旁组织没有显著的差异(P=0.8963)，miR-126在转移性肾癌组织中较局限性肾癌组织表达上调。与HKC相比，miR-126在786-O和769P中高表达，与786-O和769P相比，miR-126在Caki-1、ACHN和SN12-PM6中低表达。与空质粒和只加转染试剂两个对照组相比，miR-126过表达和敲低质粒依次使得293T细胞中的miR-126明显升高和没有显著改变。
结论:miR-126可能在肾癌的不同阶段和不同的组织成分中发挥着不同的作用，构建的miR-126过表达和敲低质粒可以作为强有力的实验手段用于miR-126功能学研究。