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背景肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率占各种恶性肿瘤的首位,且其预后不佳,患者的5年生存率不足15%。到目前为止,肺癌的发病机制仍不清楚,但其发生,发展与肿瘤细胞逃离机体免疫监视密切相关。研究表明机体免疫细胞分泌的各种细胞因子在机体免疫监视,清除肿瘤细胞方面作用显著,如IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6等。在这些细胞因子中,IFN-γ作为正性调节因子在抑制肿瘤发生和发展中发挥了重要作用。最新证据表明,肺癌患者中IFN-γ水平下降,不仅导致细胞免疫功能下降,同时,体液免疫应答也随之降低。细胞因子的表达调控是一个复杂的过程,其基因表达可通过表观遗传学进行调控。DNA甲基化是一种重要的表观遗传学修饰。有研究证实IFN-γ基因表达与DNA甲基化密切相关。DNA子甲基化主要是从转录水平下调基因表达,被认为是一种抑制IFN-γ表达的长效机制。因而我们考虑肺癌中出现的IFN-γ水平紊乱可能与DNA甲基化存在密切关系。而引起IFN-γ基因启动子甲基化改变的确切机制,肺癌细胞是否能引起CD4~+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平改变从而导致IFN-γ表达下调,目前尚未证实。因此本研究主要探讨CD4~+T细胞IFN-γ基因表达下调与肺癌细胞之间是否存在直接的关系,从表观遗传学的方面为肺癌的免疫抑制及肿瘤的免疫逃避提供重要依据。目的研究肺癌细胞对CD4~+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平的影响,观察IFN-γ表达水平变化,从而确定肺癌患者CD4~+T细胞IFN-γ基因表达下调的机制。方法ELISA法检测肺癌组(n=30)及健康对照组(n=30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠阳选法分选两组外周血CD4~+T细胞(肺癌组n=11,健康对照组n=10),提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4~+T细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外共培养实验(n=6),并设健康人CD4~+T细胞单独培养组为对照组,培养5天后分别收集CD4~+T细胞。CD4~+T细胞按上述法进行TA克隆测序。同时将CD4~+T细胞经Anti-CD3,CD28刺激6h,24hELISA法检测两组上清IFN-y表达水平,荧光定量RT-PCR检测CD4~+T细胞IFN-γ mRNA表达水平。结果肺癌组血浆IFN-y水平显著低于健康对照组(69.30±38.56 pg/ml vs 92.62±34.75 pg/ml,P=0.017);肺癌组CD4~+T细胞IFN-y基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组(84.6%vs 68.6%,P<0.001);肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关(r=-0.787,P=0.004)。体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4~+T细胞Anti-CD3,CD28刺激6h,24h后IFN-y表达水平显著下降(6h:14.53±7.12pg/mlvs36.14±23.51pg/ml;24h:7.81±4.02 pg/ml vs24.85± 15.58 pg/ml),6h 对照组 CD4~+T 细胞 IFN-y mRNA 表达水平为实验组的2.37倍。实验组CD4~+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组(85.4%vs70.9%)。结论肺癌细胞可诱导CD4~+T细胞IFN-y基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-y基因表达下调,对肺癌患者的免疫抑制起重要作用。