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水稻白叶枯病是严重影响水稻产量的三大病害之一。推广抗病品种和使用农药是防治白叶枯病的主要技术措施。但是,有效抗白叶枯病基因资源的缺乏和白叶枯病原菌抗药性的增强对水稻的生产造成严重的危害。因此,寻找新的抗病基因和开发新型农药对进一步防止水稻白叶枯病具有重要意义。抗菌类多肽由于其杀菌作用机制独特,有望成为新一代“抗菌素”。新型抗菌蛋白E12对包括大肠杆菌TOPO10和铜绿假单胞菌P. aeruginosa PAO1在内的多种细菌都有良好的杀菌效果。为了研究E12抗菌蛋白对水稻黄单胞杆菌的杀菌效果,我们通过E12基因在水稻黄单胞杆菌体内表达来观察其对黄单胞杆菌的抑菌效果,通过E12转基因水稻接种实验来验证E12对黄单胞杆菌的体外抑菌效果,并尝试采用原核表达系统表达和纯化E12蛋白。主要实验结果如下：1.采用原核表达系统,将E12基因克隆进原核表达载体pGEX-6P-1,构建GST-E12融合表达载体,转入大肠杆菌BL21,经IPTG低温诱导表达产生GST-E12融合蛋白,并通过GST亲和层析纯化GST-E12蛋白,SDS-PAGE和Western blotting结果证实,GST-E12融合蛋白能在大肠杆菌原核表达系统中正确表达。2.将E12基因克隆至粘粒表达载体pHM1-30T,转化水稻黄单胞杆菌R6,获得带有E12基因的黄单胞杆菌克隆R6/E12。生长曲线和CFU点板试验表明,R6/E12菌株与对照菌株R6/30T(带有pHM1-30T质粒)相比,繁殖速度变慢,生长明显受到抑制。显微观察显示,R6/E12菌株的形态发生改变,细胞拉长,且细胞密度变小。3.将密码子优化的E12基因克隆至双元载体pZH2BiKXB,构建pZH2BiKXB-E12过表达载体,转化水稻日本晴,获得水稻的3个独立转化株系均能过量表达E12基因,转化植株的后代白叶枯病抗性仍待鉴定。