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生物毒素由其来源大致可分为真菌毒素、细菌毒素、植物毒素、动物毒素及海洋生物毒素等。本研究选取11种生物毒素进行研究,其中包括细菌毒素金黄色葡萄球菌5种主要肠毒素(SEA、SEB、SEC、SED、SEE),A型肉毒毒素(Bo NT-A),产气荚膜梭菌α毒素(CPA)和产气荚膜梭菌ε毒素(ETX);两种植物毒素相思子毒素(AT)和蓖麻毒素(RT),一种小分子真菌毒素T-2毒素。这11种毒素均可以引起人类中毒事件的发生。中毒事件一旦发生,最重要的就是快速检测出中毒毒素的种类和大致剂量。为提高这11种毒素的检测效率,本研究建立了这11种毒素的Alpha LISA检测体系。研究分为两个部分,第一部分建立了针对10种毒素(SEA、SEB、SEC、SED、SEE、Bo NT-A、CPA、ETX、AT、RT)的双抗体夹心Alpha LISA检测体系。研究的第二部分针对小分子T-2毒素建立了竞争法Alpha LISA检测体系。Alpha LISA技术是一种快速检测方法,这种方法所需样本量小,操作简便,用时较少,准确度高。在建立这11种毒素的Alpha LISA检测体系中,我们首先利用ELISA技术筛选出每种毒素的最适配对抗体,用筛选出的最适抗体进行Alpha LISA预实验,优化反应条件,确定每种毒素的最适检测方案。然后,使用11种纯化毒素进行Alpha LISA检测,绘制毒素的标准曲线,评价每种毒素的检出限、特异性、重复性等指标。随后,设计制备SEA模拟样本,Bo NT-A模拟样本,T-2毒素模拟样本评价Alpha LISA检测体系的灵敏度。我们还搜集了肉毒毒素临床样本对肉毒毒素Alpha LISA检测体系进行评价,比较试验结果与临床症状的相关性。研究结果显示,在我们所建立的11种毒素Alpha LISA检测体系的灵敏度均在1ng/m L以下,其中SEB的灵敏度达到25pg/m L。特异性良好,建立完成的11种毒素Alpha LISA检测体系均未与其它毒素发生交叉反应。重复性较好,批间和批内变异系数均在10%以下。本研究第一部分中在以SEA模拟样本评价Alpha LISA检测体系时,该方法表现出对食品基质的良好的抗干扰能力:在SEA全脂牛乳模拟样本中,Alpha LISA检测方法的最低检出限(LOD)为0.1ng/m L。在10%(w/v)浓度的SEA乳制品模拟样本中,Alpha LISA检测方法的LOD为0.1ng/m L;在20%(w/v)浓度的SEA乳制品模拟样本中,LOD只能达到1ng/m L。在10%(w/v)和20%(w/v)两种浓度的SEA豆制品和腌制肉类模拟样本中,Alpha LISA检测方法的LOD均可以达到0.1ng/m L。除20%(w/v)浓度的SEA花生酱模拟样本的LOD为0.2ng/m L以外,花生酱、豆瓣酱和火腿肠这三种食品模拟样本在不同稀释质量分数下的LOD均为0.1ng/m L。采用A型肉毒毒素血浆模拟样本评价Alpha LISA检测体系时,由于血浆中部分成份的影响,血浆原液中Bo NT-A的LOD只能到0.4ng/m L,但缓冲液等比稀释的血浆中,Alpha LISA检测Bo NT-A的LOD为0.1ng/m L。A型肉毒毒素蒸馏水模拟样本中,Alpha LISA检测Bo NT-A的LOD可以达到0.1ng/m L。本研究第二部分中以T-2毒素模拟样本评价Alpha LISA检测体系时,在2%(w/v)、5%(w/v)和10%(w/v)浓度的T-2毒素玉米粉模拟样本中,Alpha LISA检测方法的LOD均可以达到0.05ng/m L,与缓冲液中LOD一致。以T-2毒素商业化模拟样本评价Alpha LISA检测体系时,2%(w/v)浓度T-2毒素模拟样本的回收率为89.49%～96.29%,商业化ELISA试剂盒的回收率为80.25%～121.29%,Alpha LISA检测方法的回收率明显优于ELISA。当T-2毒素模拟样本的浓度稀释至1%(w/v)时,Alpha LISA检测方法的回收率为87.16%～92.50%,商业化ELISA试剂盒的回收率为37.52%～95.16%,可见在低浓度的模拟样本中,Alpha LISA方法依然可以获得较好的回收率。本研究建立了可以引起人类中毒的11种毒素的Alpha LISA检测体系,与常用的ELISA方法相比,该方法可以提供快速、高特异性和高灵敏度的检测,可为此11种毒素中毒的检测提供参考。