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本论文主要研究番茄温敏核不育系的离体扦插和花药培养两方面。扦插方面主要从不同基质、不同茎段部位、不同激素种类及浓度等方面进行研究;花药培养方面主要从外植体的选择与灭菌,愈伤组织的诱导、继代增殖和分化,愈伤组织的倍性鉴定等方面进行研究。
1、扦插试验结果表明:
(1)扦插基质以泥炭+珍珠岩+菜园土(2:1:1)组合处理效果最好,T7成活率达70.00%,平均每株生根数23.50条;T8成活率达68.33%,平均每株生根数21.82条。
(2)枝条上部的茎段扦插效果最好,T7成活率达75.00%,平均每株生根数28.06条,T8成活率达73.33%,平均每株生根数26.75条,与中部、下部茎段的差异均达极显著水平。
(3)激素处理对番茄温敏核不育系扦插效果的影响明显。单一激素以IBA9mg/L的处理效果最好,T7成活率达63.33%,平均每株生根数32.10条,T8成活率达65.00%,平均每株生根数30.98条;不同激素配合以IBA6mg/L+ABT50mg/L的处理效果最好,T7成活率达100%,平均每株生根数48.03条,T8成活率达96.67%,平均每株生根数45.52条。
2、花药培养试验结果表明:
(1)0.1%HgCl2和10% NaClO两种灭菌剂配合使用的灭菌效果优于单一灭菌剂,灭菌效果最佳的处理为:0.1%HgCl28min+10%NaClO8min,T7的污染率和出愈率分别为1.95%和71.73%,T8的污染率和出愈率分别为2.08%和68.34%。
(2)三种基本培养基对番茄温敏核不育系花药愈伤组织的诱导效应:MS>Miller>B5。在这三类培养基中,T7花药愈伤组织诱导率依次为:70.56%、62.86%、53.07%;T8花药愈伤组织诱导率依次为:69.24%、64.03%、52.19%。
(3)小孢子处于单核靠边期的花药愈伤组织诱导率最高,T7和T8的花药愈伤组织诱导率分别为70.12%和68.81%,与四分体时期、单核早中期、双核期有极显著差异;处于单核靠边期的花蕾花药长度在5~7.5mm,花药多为黄绿色或淡黄色。
(4)4℃低温预处理1d可提高花药愈伤组织的诱导率,减轻花药褐变现象,T7愈伤组织诱导率和花药褐变率分别为70.64%和27.67%,T8愈伤组织诱导率和花药褐变率分别为69.36%和27.18%,与对照处理及4℃低温预处理3d、5d有极显著差异。
(5)对接种后花药暗培养10d再进行光照培养,可提高愈伤组织诱导率,T7、T8的愈伤组织诱导率分别达71.28%、70.32%,与全暗、光照培养有极显著差异。
(6)2,4-D能有效的诱导出花药愈伤组织,适宜浓度为1mg/L,T7和T8的花药愈伤组织诱导率分别为70.56%和69.24%,与其他浓度有极显著差异。
(7)一定浓度范围内的6-BA、KT和2,4-D、NAA间的配组对番茄温敏核不育系花药愈伤组织的诱导起促进作用。愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D1mg/L+ KT1mg/L,T7、T8的花药愈伤组织诱导率分别达到81.82%、79.36%。
(8)蔗糖适宜浓度为35g/L时,T7、T8的花药愈伤组织诱导率均最高,分别达到76.13%、74.29%,与其他处理比较差异达极显著水平。
(9)培养基中添加适当浓度活性炭(0.01%~0.1%)对减轻花药培养中花药褐变有利,但对愈伤组织诱导有不利影响。
(10)添加300mg/L的水解乳蛋白可以提高番茄温敏核不育系花药诱导愈伤组织的能力,T7、T8的愈伤组织诱导率分别达68.82%、68.16%。
(11)基本培养基MS比Miller、B5更利于番茄温敏核不育系花药愈伤组织的增殖,产生的愈伤组织质量好。在这三类培养基中,T7愈伤组织增殖倍数依次为4.10、2.53、2.33; T8愈伤组织增殖倍数依次为4.05、2.45、2.29。
(12)番茄温敏核不育系花药愈伤组织的增殖以MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L为最佳培养基,T7、T8的愈伤组织增殖倍数分别为4.37和4.20。
(13) T7的花药愈伤组织继代到第六代,增殖倍数最大,达12.56倍,T8的愈伤组织在第五代达到最大值,为12.21倍。
(14)番茄温敏核不育系花药愈伤组织分化出不定根,但未分化出不定芽。
(15)分化出的不定根经染色体计数基本为2n=2x=24,但有一个T7的细胞染色体数目为2n=3x=36。