LncRNA XIST抑制miR-101调控胰腺癌生长与转移的作用研究

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目的:研究胰腺癌组织及胰腺癌细胞中LncRNA XIST、miRNA-101的表达量及它们之间的表达关系,进一步研究LncRNA XIST对miRNA-101的调控作用和LncRNA XIST对胰腺癌生长与转移的影响。方法:收集胰腺癌患者经过手术治疗切除的肿瘤组织及癌旁组织标本,同时培养两种胰腺癌细胞,分别计算胰腺癌组织和细胞中LncRNA XIST与miRNA-101的表达量,得出二者表达量之间的相关性。进行双荧光素酶实验验证LncRNA XIST与miRNA-101之间具有单向调控关系,将培养的两种胰腺癌细胞进行转染,得到转染后的细胞分别是XIST敲低组、XIST增强组和对照转染,Real-time PCR检测计算基因表达量以及验证转染的准确性。转染后的各组细胞分别进行细胞活力检测实验(CCK-8)、细胞增殖实验(划痕实验)、迁移侵袭实验(Transwell),再进行两种基因的共转染,得到Control、shXIST、shXIST+miR-NC、shXIST+miRNA-101inhibitors(Panc-1组)及Control、XIST、XIST+miR-NC、XIST+miRNA-101mimics(BxPc-3组)。最后将转染XIST增强、XIST敲低和对照组的胰腺癌细胞种植到裸鼠腹股沟皮下,测量成瘤体积。研究LncRNA XIST通过抑制miRNA-101的表达对胰腺癌生长和转移产生的影响。结果:胰腺癌组织中肿瘤组织的LncRNA XIST表达量较高,miRNA-101表达量较低,癌旁组织中LncRNA XIST表达量较低,miRNA-101表达量较高,且miRNA-101的表达与LncRNA XIST成负相关(P<0.05)。Panc-1组中各转染细胞的miRNA-101表达量逐步增高,OD值差异明显(P<0.05),提示转染成功且对应的转染XIST敲除细胞划痕实验提示细胞增殖能力降低,Transwell实验提示下层小室癌细胞分布度降低,侵袭能力减弱(P<0.05);BxPc-3组中各转染细胞的miRNA-101表达量逐步降低,OD值差异明显(P<0.05),提示转染成功且对应的转染XIST增强细胞划痕实验提示细胞增殖能力增高,Transwell实验提示下层小室癌细胞数量明显增加,侵袭能力增强(P<0.05)。裸鼠成瘤实验中转染XIST增强的裸鼠成瘤体积与转染XIST敲除的裸鼠相比较大(P<0.05)。结论:LncRNA XIST能够促进胰腺癌细胞的增殖与侵袭,LncRNA XIST能够抑制miRNA-101在胰腺癌细胞中发挥的抑癌作用。
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