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药物的控制释放和人体内的靶向性以及使药物在安全疗效范围内长效释放的给药技术是当今化学、医学和药学领域中一个重要的热点课题。目前由于多肽、蛋白质药物具有高针对性和高活性的特点使其成为治疗人类疾病的不可缺少之物。这就需要一种高分子复合材料作为药物控释载体来实现。
聚电解质复合物是近年来药物控释载体材料研究的一个重点,且其具有制备工艺简单,生物相容性和降解性良好等特点。更重要的是聚电解质复合物具有优越的环境响应性和药物控释性能,还可以实现多肽、蛋白质等生物活性物质在温和条件下的包埋缓释,因此本文对这类复合物进行了研究。
为了克服多肽、蛋白质药物在常温下稳定性差、在体内易降解、半衰期短等缺点,扩大其应用范围,本文首次以壳聚糖(CS)作为聚阳离子电解质,果胶(Pectin和透明质酸(HA)作为复合聚阴离子电解质,制备了具有优异pH响应性的CS/HA/Pectin聚电解质复合水凝胶。通过红外光谱仪、扫描电镜、紫外-可见光分光光度计、荧光法、重量分析法等仪器和方法对该复合水凝胶的化学结构、CS与HA、Pectin间分子作用、溶胀性能及对pH的响应性进行了初步表征;并用考马斯亮蓝法测定和探讨了该复合水凝胶对牛血清蛋白(BSA)的包埋和释放性能。结果表明:
(1)通过红外光谱分析,证实了CS/HA/Petion复合水凝胶的离子交联结构,并通过扫描电镜观察了水凝胶的相态结构,当CS/HA/Pectin的质量配比为3:2:1合成的水凝胶颗粒的最小直径在400nm左右。
(2)通过电位滴定测试了各组分在不同pH值缓冲溶液中的离子化程度,在低pH值缓冲溶液中,果胶和透明质酸中的羧酸的电离基本上被抑制离子化程度较低,pH<5时离子化程度都不到0.2,而对于壳聚糖而言,情况刚好相反,当pH值大于6.0时,氨基的离子化程度急剧下降,最小还不到0.1。
(3)使用浊度滴定法分析了水凝胶分子间的相互作用,当pH升至在4.3~6.3之间时,水凝胶的浊度随着pH的增大而增大,由2%增大为52%。说明壳聚糖与透明质酸/果胶之间的相互作用逐步增强,当pH=6.3时达到最大值52%。
(4)通过荧光光谱证实了BSA分别与CS、HA和Pectin之间在pH≤6时存在着一定静电相互作用,BSA的最大荧光强度Imax减弱,依赖于CS/BSA的质量比,且在Ri=0.4时,与CS结合的BSA分子数量最多。
(5)通过对各组分和复合水凝胶的DSC分析,表明EWC和冻结水随着HA含量的增加都在增加,而非冻结结合水含量在减少,当HA占1/3时EWC可达到74.9%。
(6)在pH=7的缓冲溶液中,水凝胶的最大溶胀度随着温度的升高先增加后减少,均在37℃时出现最大平衡溶胀率。HA含量的增加会使其温度敏感性稍有提高。在20℃下制备的系列复合水凝胶在pH=3~8缓冲溶液中的溶胀,当CS/HA/Pectin的质量配比为3:2:1合成的复合水凝胶在pH=7左右出现最大溶胀率可达1227%,说明该水凝胶具有良好的pH响应性溶胀。另外温度升高使水凝胶的pH敏感性明显降低,且其溶胀率随着离子强度的增大而逐渐增大,此外冷冻干燥有利于其溶胀。
(7)将复合水凝胶在两个不同pH下反复进行溶胀测试,溶胀率出现一定的回复,回复率达92%以上,说明该水凝胶具有较好的溶胀可逆性。
(8)随着BSA与CS的投料比的增大,包埋量明显增大。当CS/HA/Pectin的质量配比为3:2:1,投料比为60%时,实测包埋量达22.50%,包埋率均在97%以上。表明该水凝胶对牛血清蛋白具有优异的包埋性。而且在24~120小时内累积释放率较少,说明其具有优良的缓释行为。此外随着HA含量的增加及其分子量的降低都会加快BSA的释放,且增大释放介质的离子强度会加快复合物解离过程和BSA的释放速度。