论文部分内容阅读
干酪乳杆菌在制作功能性酸乳、发酵豆乳、干酪和乳酸菌饮料当中广泛应用。由于干酪乳杆菌优良的发酵风味和良好的功能性,其在食品研究与开发中占有重要地位。干酪乳杆菌SY13分离自传统乳制品。经研究表明,干酪乳杆菌SY13具有良好的抗氧化功能。粘附在人体肠道中的益生菌能够调节肠道菌群,抑制肠道病原物生长。益生菌在人体肠道粘附定植是其进一步发挥益生功能的前提。对于乳酸菌的粘附能力测定主要集中于细胞研究,但是,单纯的细胞培养与现实的肠道环境相去甚远。本文针对干酪乳杆菌SY13在BALB/c小鼠肠道粘附属性的研究,开发了在BALB/c小鼠肠道内干酪乳杆菌的检测方法,并对干酪乳杆菌SY13在BALB/c小鼠肠道粘附规律进行了测定和粘附规律原因的解析。具体研究内容如下: (1)本论文采用TaqMan-MGB RT-PCR来实现干酪乳杆菌SY13在BALB/c小鼠肠道内的检测。引物设计的模板选取的是干酪乳杆菌的特有基因CasX,DNA标准品的制作是通过目标片段连接T载体,蓝白筛选而制得。引物的特异性是通过筛选遗传相近乳杆菌扩增阴性来证明的。方法的标准方程曲线是Y=-3.531gC+45.28(R2=0.998,Y代表CT,C代表标准品DNA浓度,PCR的扩增效率是92.011%),试验方法的检出限是102copies/μL。经引物的特异性验证和后续的小鼠试验证明,方法可行。 (2)本论文通过BALB/c小鼠体内试验测定干酪乳杆菌SY13肠道粘附能力。实验发现,干酪乳杆菌SY13在小鼠的盲肠和结肠中分布较多,空肠分布较少,回肠中未发现目标菌。本研究从干酪乳杆菌SY13的灌胃时间,宿主年龄和益生元的影响三个方面对干酪乳杆菌SY13的粘附能力进行了分析。结果表明,灌胃时间,宿主年龄和益生元都对干酪乳杆菌SY13的粘附能力有影响。灌胃时间越长,干酪乳杆菌SY13的数量越多,在宿主肠道内的保留时间也越长(单次灌胃,保留时间是3天;28天灌胃后,保留时间大于7天)。益生元能够改变干酪乳杆菌SY13在小肠中的分布。同时灌胃益生元和干酪乳杆菌SY13后,在回肠中检测到了目标菌。在灌胃干酪乳杆菌SY13后,青年组小鼠中的回肠中,并未检测到目标菌,但是在老龄组中,却能检测到。研究结果表明灌胃时间越长,有益生元辅助,越有利于干酪乳杆菌SY13在小肠中的粘附。 (3)本论文对干酪乳杆菌SY13在小鼠肠道内的粘附规律的原因进行了探究。选取了部分试验小鼠盲肠肠内容物的基因组DNA进行了16S rRNA扩增子的测序试验。试验发现,青年组小鼠的肠道核心微生物菌群数量大于老龄组(青年组145左右,老龄组115左右)。灌胃干酪乳杆菌SY13、低聚果糖和乳果糖后,alpha多样性指数升高,宿主肠道内的微生物多样性升高;经分析发现,灌胃后,试验组小鼠盲肠中的梭菌类明显下降,拟杆菌类明显上升,肠道菌群结构明显改善。 本研究所开发的干酪乳杆菌TaqMan-MGB探针检测方法为干酪乳杆菌的检测提供新的参考。本文从粘附理论的角度,为干酪乳杆菌SY13的功能性评价以及为其后期开发功能性食品或者发酵生产饲料等工业应用提供了部分的理论基础。