J亚群禽白血病病毒内蒙株的分离鉴定及其部分分子生物学特性的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:bittercoffee456
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究从曾见典型ML病例的内蒙古某肉种鸡场淘汰肉种鸡和山东一例骨髓性白血病(Myeloid Leukosis,ML)肉种鸡病例中,分离出两株J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J)。利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,两株J亚群禽白血病病毒可以被两对ALV-J特异性引物扩增(特异条带约2.2kb和545bp),且在特异性单克隆抗体JE9的间接免疫荧光检测中呈现强阳性荧光反应。负染色电子显微镜和免疫电子显微镜观察显示,两株ALV-J具有禽白血病病毒的典型形态特征,分别命名为J亚群禽白血病病毒IMC10200株和SDC2000株。将分离毒株回归感染肉鸡,21周龄时特异性引物PCR抽查检测,抽查感染鸡全部为阳性;42周龄后出现典型ML病例。 分离毒株囊膜基因和3′端非编码区测序分析表明,ALV-J IMC10200株和SDC2000株此段DNA的同源性为97.1%。将囊膜基因翻译为氨基酸序列,两株病毒囊膜前体蛋白氨基酸序列达99%,分子量分别为56658.60 dalton、56704.58 dalton;与国内ALV-JSD9901和YZ9901株同源性达93.7%~96.2%,与原型株HPRS-103有89.9%/91.2%的同源性。生物进化树分析显示,在已发表ALV-J毒株中IMC10200株和SDC2000株的变异幅度位于ADOL-R5-4株和1696株之间。IMC10200株和SDC2000株env变异主要发生在gp85的hr1和hr2区,并在囊膜前体蛋白氨基酸序列169位Jameson-Worlf抗原表位优势显著升高,有可能产生新的潜在抗原位点。3′端非编码区内,两株病毒rTM和E组分不同程度缺失。 对ALV-J IMC10200株囊膜基因和3′端非编码区进行克隆,并以克隆的重组质粒pGEM-IMC2.2为模板进一步扩增克隆IMC10200株gp85基因。研究中采用Bac-to-Bac杆状病毒真核表达系统(非融合蛋白性表达载体pFastBacl)在Sf9细胞中表达了IMC10200株gp85基因。表达物拥有ALV-J病毒的抗原特异性,与ALV-J JE9单克隆抗体有强的间接免疫荧光反应。Western blotting结果分析表明,表达物分子量约54kD。 为深入探讨ALV-J的亚群特性,本研究利用ALV-J gp85基因两侧的序列片段为引,物从正常SPF蛋鸡、商品肉鸡和DF1细胞基因组中完整地扩增了内源性类ALV-J gp85基因。肉鸡和DF1细胞内源性类ALV-J gp85基因同源性达99.9%;SPF蛋鸡内源性类ALV-J gp85基因与肉鸡和DF1细胞的内源性类ALV-J gp85基因之间同源性达95.6%、95.3%。三种不同来源的内源性类ALV-J gp85基因DNA与IMC10200株ALV-J的gp85基因的同源性分别为91.8%、94.1%、94.0%;与ALV-J原型株HPRS-103 gp85基因的同源性分别为95.6%、98.3%、99.9%。内源性类ALV-J gp85序列与外源性ALV-J gp85基因具有相似或一致的ORF和Jameson-Worlf抗原表位优势。这一结果显示了J亚群ALV与宿主内源性反录病毒的密切关系。 J亚群禽白血病病毒IMC1020。株和 SDC20*株的分离鉴定、IMC1020。株gP8)基因表达以及内源性类 ALVJ gp8)基因的研究与分析,为深入了解 ALVJ的生物学特性、致病机理等奠定了基础,也对开展我国ALVJ的诊断和预防有着重要的现实意义。
其他文献
随着社会的发展和进步,我国的教学理念和教育方式发生了重大改变。最初小学阶段的语文教学通常都是以统一式、填鸭式、满堂灌、老师讲、学生听这类的教学模式为主,这些教学模
1985~2001年16年间我们曾经对500余例正常健康成人中50例脑电图(EEG)异常者进行随访,结果EEG始终无改变,这也符合有关文献报道的轻度异常EEG可见于10%~15%的正常人的观点.现报
财务报表作为企业中财务状况以及经营成果的反映,企业中对财务报表进行准确分析,能够为管理层的决策提供重要的参考,而财务报表的准确性越高,则管理层决策越符合市场需求。本
在新的时代背景下,我国的经济在不断向前发展。由于沥青路面具有表面平整、耐磨性高以及施工时间短等特点,所以在公路建设过程中得到了广泛的应用。在实际的施工过程中,还要很多
保护和开发利用福州市独具特色的历史文化资源,可以彰显福州历史文化的价值和魅力。在已有保护和开发的基础上,福州市要进一步加大历史文物保护,构建全域化历史文化遗产保护
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
随着时代的发展与进步,现代社会已然是一个高度现代化、信息化的社会,各种新思想、新观念、艺术思潮不断出现,对传统文化艺术带来了前所未有的冲击,漆艺也不例外。在这一背景
[摘 要] 国家质量基础(NQI)提出的计量、标准化、合格评定是国家未来经济可持续发展的三大支柱,在国家宏观调控的背景下如何对NQI进行量化计算,论文进行了设计方法及应用的探讨。首先介绍了其概念的来源,接着探讨了NQI的计算方法,然后就NQI发展现状对我国和世界其他国家进行了对比,最后对我国31个省级行政区NQI能力进行了比较分析并做出总结。  [关键词] NQI;国家质量基础; 评价指标  d
植物神经功能障碍(AD)作为吉兰—巴雷综合征(GBS)的合并症状临床上较常见,但以AD为首发症状的GBS不为人们注意。我院在1996~1998年共收治50例GBS,并常规行肌电图检查(EMG),现将其
次贷危机以来,福州的工艺美术业发展逐渐进入低谷期,隐藏的发展问题慢慢显现。低增长、调结构、促创新成为福州工艺美术业发展的新常态。低谷期也是福州工艺美术业的力量积蓄