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钙调素结合蛋白的分离鉴定及其结构功能、理化性质的研究对阐明 Ca2+/CaM在生物体内的复杂调控机制具有重要意义。为了明确 SCBP60g蛋白在拟南芥中的表达模式及其功能,本论文进行了如下研究: 1、采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并和GUS报告基因相融合,将构建好的重组表达载体转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织化学染色,结果表明:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告基因在拟南芥的根、茎、叶和花中表达,并且在这些部位的维管束表达较强。 2、通过 RT- PCR技术从拟南芥中克隆获得 SCBP60g基因的cDNA序列,利用Gateway克隆技术将SCBP60g基因的cDNA和GFP报告基因相融合,构建了 CaMV35S启动子驱动的融合表达载体 p35S::GFP-SCBP,以空载体 p35S::GFP为对照。将重组载体转化野生型拟南芥,并经筛选获得 T2代转基因株系。利用激光扫描共聚焦显微镜观察转基因株系的根部细胞,结果发现:转空载体的株系绿色荧光分布于整个细胞膜、细胞质和细胞核中,转 p35S::GFP-SCBP载体的株系绿色荧光分布于细胞核内,表明 SCBP60g蛋白定位于细胞核内。 3、通过 RT-PCR技术从拟南芥中克隆获得 SCBP60g基因的cDNA序列,利用Gateway克隆技术将SCBP60g基因的cDNA序列融合到双元载体 pMDC32上,构建了 CaMV35S启动子驱动的表达载体 p35S::SCBP,将构建好的互补载体转化 cbp60g-1突变体,并经筛选获得转基因纯合株系。通过细菌生长量检测,对 SCBP60g蛋白的功能进行初步的探讨。