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神经退行性疾病不仅使患者的生活质量严重下降,也给社会带来了沉重的负担。因此寻找具有治疗作用的药物成为当今生物医学领域的重要任务之一。
脑缺血是多种神经退行性疾病发生发展的病理学基础,在临床上导致患者神经元死亡从而引起行为障碍。全脑缺血所引起的认知能力损伤与海马CA1区神经元的丢失有明显的相关性。
在用沙土鼠进行的短暂性全脑缺血动物模型中,本研究观察了缺血后持续给以加兰他敏对动物在被动逃避行为测试实验中的表现以及海马CA1区神经元的变化的影响。与阴性对照组相比,生理盐水组沙土鼠在被动逃避行为测试实验中显示出明显的认知能力受到损伤,而且进一步的组织学观察发现其海马CA1区神经元大部分已经丢失。而给加兰他敏组沙土鼠在行为测试中的表现接近于阴性对照组;组织学观察则显示大部分本来对缺血所致的损伤易感的海马CA1区神经元在经过加兰他敏治疗后存活了下来。因此,实验结果表明,加兰他敏可能可以应用于治疗临床上某些由于缺血引起的疾病。
帕金森氏病(PD),主要是以锥体外系中黑质多巴胺能神经元进行性减少引起的神经退行性疾病综合症。位于多巴胺能神经元的多巴胺转运蛋白(DAT)负责清除突触间隙的神经递质;然而,神经毒物如MPTP致使多巴胺神经元发生死亡却依赖于DAT。因此,DAT抑制剂可能是一种治疗PD的选择。应用分离制备的大鼠纹状体部的突触体,以及稳定表达DAT的CHO(D8)细胞体外检测,研究证实洛贝林对DAT向细胞(或突触体)内转运同位素标记的底物活力具有抑制作用。
同样,利用D8细胞,本研究结果显示洛贝林对DAT反向转运功能却没有明显的影响。应用MPTP诱导的小鼠PD模型,发现洛贝林可以有效改善MPTP诱导的小鼠运动能力下降,并且发现洛贝林可以减少实验动物的黑质部位的神经元的丢失。因此,本研究认为洛贝林具有改善PD患者综合症的潜在的应用价值。
兴奋性氨基酸转运蛋白家族(EAATs)是脑内最主要的兴奋性氨基酸清除机制,对维持脑内谷氨酸浓度在毒性范围以下和大脑正常的生理功能至关重要。因此,它们与中枢神经系统疾病有密切的关系,也是重要的药物作用靶点。在应用CHO细胞表达EAAT进行功能研究时,发现CHO细胞自身具有很强的谷氨酸转运活力。本研究证实了这种转运活力的存在,并且这种转运活力在亲和力和离子依赖的特征上与已克隆的神经系统来源的兴奋性氨基酸转运蛋白类似。对其药理学特征的研究结果显示这种转运活力不太可能是由类GLT-1/EAAT2或者EAAC1/EAAT3的转运蛋白介导。
同时,本研究克隆获得了一条全长的编码类GLAST/EAAT1蛋白的cDNA序列。经过测序后分析发现,这一CHO-GLAST蛋白的氨基酸残基序列与已知物种(人、大鼠、小鼠)的GLAST蛋白的序列同源性达到95%~98%。
总之,在CHO细胞中存在一种与GLAST/EAAT1蛋白同源的蛋白表达,此蛋白可能就是上述CHO细胞内源性的高亲和力的Na+依赖的谷氨酸/天冬氨酸转运活力的执行分子。这也提示CHO细胞可以作为一种有效的研究EAAT1功能和筛选调控EAAT1的药物的细胞模型。