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第一部分：脑肿瘤干细胞体外分化的形态、标志物和细胞增殖动力学特征 目的 探讨脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cell，BTSC)在体外分化过程中的细胞形态、分化相关标志物表达和增殖动力学变化，为进一步研究BTSC分化走向提供实验依据。 方法 取来自于临床手术标本(病理诊断为间变性室管膜瘤)的肿瘤干细胞球(原发和复发)，用CD133免疫磁珠分离出CD133~+细胞，加血清分化，相差显微镜下观察其形态，在未分化和分化后第3、7、10、21天收集细胞，流式细胞术检测细胞CD133、Nestin、GFAP、β-TubulinⅢ的表达。在未分化和分化第7天做增殖周期测定。取正常神经干细胞(neural stem cell，NSC)作为对照。 结果1) 形态：BTSCs由圆形到短梭形和多角形、再到长梭形及少量星形，第7天以后细胞形态往短梭形和圆形回复，出现细胞聚集成球重新飘浮在培养基中：NSCs按固有规律分化：从圆形到多角形和梭形再到星形胶质细胞和长纤维状的神经元。2)标志物：BTSCs和NSCs未分化时CD133和Nestin均高表达，CD133分别为84.12±1.22％和86.36±1.95％，Nestin分别为80.76±1.83％和78.79±1.67％；BTSCs分化后CD133和Nestin全程表达，且先降后升，第7天表达率分别为3.65±0.17％和28.99±1.26％，第21天分别为14.63±1.16％和45.46±1.27％：GFAP和β-TubulinⅢ表达量一直偏低，但GFAP阳性表达率相对高于β-TubulinⅢ；NSCs在分化第十天时失去了CD133和Nestin的表达，GFAP和β-TubulinⅢ表达量明显增加，分别为88.94±1.23％和11.94±0.36％。3) 增殖周期及倍体：BTSCs分化前为亚二倍体，分化后有少量二倍体和大量亚二倍体及超二倍体，处于G2-M期和S期的细胞比例大于NSCs，复发BTSCs分化后细胞组成比原发BTSCs复杂；神经干细胞分化前后都为整二倍体，主要处于G0-G1期。 结论 细胞形态、标志物的表达、增殖周期及倍体变化反映出脑肿瘤干细胞分化走向