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研究背景：结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,近些年来在我国的发病率和死亡率呈上升趋势。早发现,早治疗是改善预后的重要因素。美国等西方发达国家均有完善的结直肠癌筛查方案,并且随着方案的开展,结直肠癌的发病率和死亡率已经呈下降趋势。我国由于受到各种因素的制约,目前尚无成熟的筛查方案。近些年来随着健康意识的不断增强,重视健康查体的人也越来越多,由于受到医疗资源的制约并且结肠镜检查具有痛苦和风险性,因此体检人群该如何选择结肠镜检查尚不明确。有研究表明我国结直肠癌高危因素主要包括阳性家族史,肠息肉史,慢性便秘,腹泻,粘液血便,精神创伤史,阑尾疾病和胆囊疾病等。若根据高危因素问卷筛查体检人群中的结直肠癌高危人群,并建议高危人群接受结肠镜检查,是否可以降低结直肠癌的发病率,需要进一步探讨。流行病学资料表明,我国直肠癌多于结肠癌,与西方国家结肠癌居多有显著区别,推测可能与人种,环境,地域差异等有关。近些年来多项研究表明,结肠癌和直肠癌在病因学,临床表现,癌变分子机制等多方面存在着明显差异。我们前期的基因芯片结果表明两者在基因表达谱水平和信号传导通路上存在显著差异。本研究在此基础上挑选并验证与两者癌变有关的差异基因,为今后诊断和治疗结肠癌和直肠癌以及明确两者不同癌变机制提供参考。研究目的：一：通过结直肠癌高危因素问卷筛查体检者中的结直肠癌高危人群,并分析高危人群中接受结肠镜检查的肠镜结果,探讨通过高危因素问卷结合结肠镜检查筛查结直肠癌的可行性。二：基于基因芯片检测结果寻找结肠癌和直肠癌特异高表达的基因,进一步探讨两者癌变机制的差异,从而为今后诊断和治疗提供依据。研究方法：通过结直肠癌高危因素问卷筛查在北京协和医院体检中心于2010年5月至2011年6月接受体检的结直肠癌高危人群,并建议这部分高危人群接受结肠镜检查,分析其结肠镜检查结果的特点并探讨各项高危因素对息肉的检出效能以及各项高危因素相关的结肠镜依从性。基于前期通过基因芯片技术对12例人结肠癌和12例直肠癌组织表达谱差异检测以及差异基因参与信号传导通路显著性分析和基因产物间相互作用网络的结果,并参考文献,挑选与结肠癌或直肠癌发生可能有关的显著差异基因(TFFl,S100P, REGIA, ASCL2, XPNPEP3, OLFM-4),选取人结肠癌和直肠癌外科手术组织标本各30例,癌旁组织各30例作为对照,共计120例,并经过性别年龄,病理分期等匹配。采用逆转录PCR (RT-PCR)的方法对挑选的基因进行验证,在结直肠癌两者之间表达水平有统计学差异的基因将会进一步通过实时荧光定量PCR (Q-PCR)的方法进行验证,其中结直肠癌组织标本各15例,其相应癌旁组织各15例,共60例。根据实时荧光定量PCR的研究结果,挑选在结肠癌和直肠癌中特异高表达的基因,选取人结直肠癌组织石蜡切片标本各15例,每张切片包括癌和癌旁组织,通过免疫组化的方法进行验证,从而找到结肠癌和直肠癌各自表达特异的基因。研究结果：在所有体检者中,共有5470人接受了问卷调查,其中结直肠癌高危人群共456(8.3%)人,共有236人接受了结肠镜检查,依从性51.8%。225人接受了全结肠镜检查,其中男111(49.3%)人,女114(50.7%)人,中位年龄：50.3±11.2岁。分析225人的结肠镜检查结果,共检出结直肠息肉患者64(28.4%)人,其中进展期息肉16(7.1%)人,结直肠癌2(0.9%)人。结直肠息肉和进展期息肉的检出率在性别之间无显著差异(p>0.05),大于50岁的人群息肉和进展期息肉的检出率明显高于小于50岁的人群(p<0.01)。粘液血便对检出息肉具有最高的阳性预测值,阴性预测值和Youden指数以及最低的阴性似然比；慢性便秘对检出息肉具有最高的灵敏度和阳性似然比；恶性肿瘤病史和肠息肉病史均对检出息肉具有最高的特异度。患有肠息肉病史(p=0.004,OR=9.5),慢性腹泻(p=0.000,OR=3.2),便潜血阳性(p=0.009,OR=3.1),粘液血便(p=0.004,OR=2.0)的患者均有较高的结肠镜依从性,但依从性在性别与年龄之间并无显著性差异(p>0.05)。根据基因表达谱芯片的结果,结合文献,挑选TFFl, S100P, REGIA, ASCL2, XPNPEP3, OLFM-4进行RT-PCR验证,结果表明六基因无论在结肠癌还是在直肠癌中,与癌旁组织相比,均显著高表达(p<0.05)。TFFl,REG1A,S100P在结肠癌相比直肠癌中显著高表达(p<0.05)；ASCL2在直肠癌相比结肠癌中显著高表达(p<0.05)。基因XPNPEP3和OLFM-4在结直肠癌中表达并无统计学差异(p>0.05)。根据RT-PCR结果,选取有显著统计学差异的表达基因TFFl, S100P, REGIA, ASCL2进一步进行实时荧光定量PCR (Q-PCR)验证,验证结果表明与RT-PCR结果基本一致。选取TFF1和ASCL2,通过免疫组化的方法对结肠癌和直肠癌组织石蜡切片在蛋白水平进行验证,结果与实时荧光定量PCR结果吻合,TFFl在结肠癌组织中显著高表达(p<0.05)；ASCL2在直肠癌中显著高表达(p<0.05)。研究结论：根据结直肠癌高危人群体检者的结肠镜检查结果,表明通过高危因素问卷筛查并结合结肠镜检查对于结直肠息肉的检出率较高。粘液血便对息肉检出具有最高的阳性预测值,阴性预测值和Youden指数以及最低的阴性似然比；慢性便秘对息肉检出具有最高的灵敏度和阳性似然比；恶性肿瘤病史和肠息肉病史均对息肉检出具有最高的特异度。患有肠息肉病史,慢性腹泻,便潜血阳性,粘液血便的患者有较高的结肠镜依从性。今后应格外重视对大于50岁的高危体检者进行结肠检查,尤其要建议具有FOBT阳性,粘液血便,慢性便秘等临床表现的患者接受结肠镜检查。我们的研究对今后我国制定结直肠癌的筛查指南提供了重要理论依据。在前期基因芯片结果的基础上,所挑选的结直肠癌差异基因在mRNA和蛋白水平进行验证后,结果表明与前期芯片结果基本吻合,其中TFF1在结肠癌中显著高表达,ASCL2在直肠癌中显著高表达,表明TFF1和ASCL2有可能成为诊断结肠癌和直肠癌特异的分子标记物,并为靶向治疗新的靶点选择提供理论依据。