研究背景肿瘤化疗耐药,甚至多药耐药（Mμltidrugresistance,MDR）是目前肿瘤化疗失败的主要原因之一,在引起化疗耐药的众多机制中,腺苷三磷酸结合盒转运蛋白（ATP-binding cassette transporter,ABC转运蛋白）的高表达是关键原因之一。ABC转运蛋白是位于细胞膜表面的一类跨膜蛋白,能够转运多种化疗药物及各种小分子底物。ABC转运蛋白家族主要包括49个成员,根据它们的分子结构和转运底物不同,可将其归类为ABCA-ABCG几类,其中,P-糖蛋白（P-gp/ABCB1）、多药耐药相关蛋白（MRP1/ABCC1）、乳腺癌相关蛋白（BCPR/ABCG2）研究较为广泛。ABC转运蛋白可介导多种肿瘤的化疗耐药及MDR,而目前并没有有效的ABC转运蛋白调节剂用于临床逆转化疗耐药。已有研究证实一些酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKI）可以有效逆转ABC转运蛋白介导的MDR,拉泽替尼（Lazertinib）是一种新的第三代TKI,是一种靶向表皮生长因子受体（Epidermal growth Factor Receptor,EGFR）的特异性抗体,但拉泽替尼能否逆转ABC转运蛋白所介导的肿瘤化疗耐药及MDR,尚不清楚。本课题采用多种耐药肿瘤细胞及ABC转运蛋白转基因（P-gp、BCPR）细胞为研究对象,通过体内外实验观察拉泽替尼能否逆转ABC转运蛋白（P-gp、BCPR）介导的多药耐药,病探索其逆转机制。研究方法采用MTT法测量不同化疗药对多种耐药肿瘤细胞及亲本细胞的细胞毒性,评估拉泽替尼体外逆转化疗耐药效果;并建立了裸鼠HepG2/adr移植瘤模型,进一步评估其体内逆转MDR效果。在探索拉泽替尼逆转MDR机制方面,采用流式细胞术分析拉泽替尼对化疗药细胞内积累及外排影响、钒敏感ATP酶实验检测 ABC 转运蛋白的 ATP 酶活性、[125Ⅰ]-iodoarylazidoprazosin（IAAP）光亲和标记实验研究拉泽替尼与ABC转运蛋白上ATP结合位点的作用关系、流式细胞术及蛋白印迹实验评估细胞膜表面ABC转运蛋白及其下游通路EGFR等蛋白的表达、qPCR测定ABC转运蛋白mRNA表达水平。结果体外实验表明,拉泽替尼可以有效逆转ABCB1和ABCG2高表达耐药细胞的耐药,分别提高ABCB1高表达耐药细胞对其底物（例如阿霉素、紫杉醇、长春新碱）以及ABCG2高表达的耐药细胞对其底物（例如米托蒽醌、拓扑替康）的敏感性;但并未改变非底物化疗药顺铂的药物疗效。其次,在裸鼠HepG2/adr移植瘤模型中,拉泽替尼增强了阿霉素对于移植瘤的生长抑制作用。在拉泽替尼体内体外逆转耐药效果的机制研究方面,实验结果表明,拉泽替尼可以有效增加耐药细胞中传统化疗药物的积累,同时减少耐药细胞中相关药物的外排。ABC转运蛋白为能量依赖的药物外排泵,其外排药物由于ATP激活而引起的,而ATP酶活性实验发现拉泽替尼可以有效抑制ATP酶活性,分子对接实验发现拉泽替尼可竞争性结合ABC转运蛋白上ATP结合位点。既往研究表明,部分TKI药物可降低耐药细胞细胞膜表面的ABC转运蛋白的表达,从而逆转耐药。本研究发现拉泽替尼在蛋白水平和mRNA水平均不会影响ABC转运蛋白的表达;同时拉泽替尼作为EGFR的抑制剂,本研究中的治疗浓度并不会明显影响EGFR的表达及其下游通路的活化。结论拉泽替尼可以在体内和体外都逆转ABCB1和ABCG2高表达细胞的耐药情况,其机制是通过竞争性结合ABCB1和ABCG2转运蛋白上ATP结合位点,减少ATP的水解释放供能,从而抑制ABC转运蛋白的药物外排功能。提示对于ABCB1和ABCG2高表达的肿瘤,拉泽替尼与化疗药物联合应用,可以增强其化疗敏感性,提高疗效。