论文部分内容阅读
人乳铁蛋白(hLF)和人免疫球蛋白 G(hIgG)具有优异的生物学性质,在人体的生理代谢和人体免疫应答中发挥着至关重要的作用,比如广谱抗细菌感染的作用、调节体内铁的平衡、调节骨髓细胞的生成、促进正常细胞的生长等。然而通过转基因技术得到的转基因人乳铁蛋白,检测手段缺乏,同时人免疫球蛋白G作为模式蛋白,对新的免疫检测方法构建有着重要意义,基于此本研究以转基因人乳铁蛋白和人免疫球蛋白G为研究对象,采用胶体金、乳胶微球和磁性微球三种材料,利用免疫反应导致的检测探针信号的变化,结合动态光散射高灵敏检测特性,对这两种蛋白的检测方法进行了探究,对可能影响检测灵敏度的条件进行一定优化,建立了简单高效、高灵敏的检测蛋白质的方法。该研究对其它蛋白质的检测体系也有着重要参考的意义。研究结果如下: 1.免疫乳胶微球动态光散射法检测转基因乳铁蛋白 以表面富含有磺酸基的三元聚合物乳胶微球为载体,通过表面较高磺酸基单体密度,改善乳胶微球的单分散性;通过调节 pH值,改善乳胶微球表面的电荷量,使其更易吸附抗体。在一定浓度乳铁蛋白存在的情况下,利用乳胶表面抗体与乳铁蛋白发生特异性反应,并结合动态光散射检测技术,对转基因人乳铁蛋白浓度的检测范围为1.0×10-8~5.0×10-7 g/mL。 2.胶体金动态光散射免疫检测转基因乳铁蛋白 利用胶体金的强光散射性和均一性,通过光散射信号的变化优化胶体金同抗体结合的条件,同时利用免标记的胶体金探针和目标蛋白共同存在的情况下通过免疫反应能够发生团聚的特性,通过动态光散射监测其粒径变化。由于胶体金具有很强的光散射性质,该方法对转基因乳铁蛋白的检测限达到1.0×10-11 g/mL。 3.胶体金与磁性微球夹心免疫动态光散射检测人免疫球蛋白的超灵敏检测 采用磁性微球作为免疫反应的载体,包被抗体后,利用免疫反应的专一性,与被测抗原反应,然后加入金标抗体在磁性微球表面形成“三明治”类复合物,通过磁性分离将该复合物移出检测区域,利用胶体金浓度同光散射强的线性关系,采用动态光散射技术,监测胶体金散射光强度的变化,对人免疫球蛋白的检测限达到了4 ng/mL。并且通过改变磁性微球同金标抗体的浓度的比例,可以调节反应的检测限与线性范围。同时,采用该方法可以探究了抗原与抗体免疫反应的结合比,结果显示人免疫球蛋白和兔抗人免疫球蛋白抗体的结合比约为1:1.8。