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中药椿皮(Cortex Ailanthi)为苦木科(Simaroubaceae)臭祷(Ailanthus)属植物臭椿(Ailanthus altissima (Mill.)Swingle)的根皮或干皮，具有清热燥湿、收涩止带、止泻、止血、杀虫等功效，可用于治疗赤白带下、湿热泻痢、久泻久痢、便血．及崩漏。现代研究发现，椿皮除了具有上述传统功效外，还兼有消炎、抗结核菌、抗EB病毒、抗阿米巴、抗疟、抗癌等作用。其中抗癌作用明显，其所含的化学成分苦木苦味素有治疗宫颈癌、结肠癌、直肠癌等作用。木文采取传统的化学提取分离与体外MTT活性筛选相结合的方法，筛选并确定椿皮抗消化道肿瘤的有效部位，进一步研究有效部位对肿瘤细胞增殖和细胞凋亡的作用用，最后通过Real-time PCR方法研究有效部位抗肿瘤的可能分子机制。研究目的：本文对椿皮进行提取，明确其抗消化道肿瘤的有效部位，并对有效部位抗肿瘤作用的可能分子机制进行初步探讨，为椿皮进一步开发和应用提供实验依据。研究方法：1.采用传统的中药水提及两相溶液萃取法，分别以水、石油醚和乙酸乙酷作为提取溶剂对椿皮进行提取，最终得到桥皮水提浓缩液、石油醚萃取相及乙酸乙酷萃取相。2.采川经典的MTT实验，分别用祷皮水提浓缩液、石油醚萃取液、乙酸乙醋萃取液作用人肝癌细胞Bel-7402、人胃癌细胞MGC-803及人结肠癌细胞HT-29,筛选出抗肿瘤作用最明显的提取物和对其作用最敏感的肿瘤细胞。3.结合MTT实验筛选出抗肿瘤作用最强的提取物，即为椿皮抗肿瘤有效部位。4.对有效部位进行薄层层析，检测其大致成分。5.采用流式细胞术，AnnexinⅤ/PI双染色法，研究椿皮有效部位对消化道肿瘤细胞早期凋亡的诱导作用。6.通过Real-time PCR以β-actin基因为内参研究有效部位对敏感肿瘤细胞Ras/MAPK信号传导通路相关基因表达的影响。研究结果：1．采用经典的MTT法研究了桥皮水提物、石油醚萃取液及乙酸乙脂萃取液对多种消化通道肿瘤细胞的增殖抑制作用，结果表明椿皮乙酸乙酝萃取液对多种肿瘤细胞均有不同形程度的生长抑制作用；进一步MTT结果显示，椿皮乙酸乙脂萃取液对MGC-803细胞的抑制作用最强，作用48h后的半数抑制浓度(IC50)为63μg/ml,且呈现出良好的剂量及时间依赖关系。因此，椿皮乙酸乙脂萃取液是抗肿瘤作用最强的提取物，人胃癌细胞株MGC-803是对其作用最敏感的肿瘤细胞。2.采用薄层色潜的方法对椿皮乙酸乙酯萃取液进行分析，推断乙酸乙脂萃取液中主要含有苦木苦味素。3.椿皮乙酸乙酯萃取液对消化道肿瘤细胞作用48h后，结果表明椿皮乙酸乙酯萃取液可诱导Bel-7402和MGC-803细胞发生不同程度的细胞凋亡,其中诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的作用最强,凋亡率达(83.15±2.51)%,并具有一定的浓度依赖性。4.椿皮乙酸乙酯萃取液对人胃癌细胞株MGC-803作用6h后,Ras/MAPK信号通路上SOS1、HRAS、MEK2基因的表达水平与空白对照组发生了较为明显的改变,且与对照组相比差别有高度统计学意义(P<0.01),其余各基因亦见农达水平下调,其中Raf-1、MEK1组差别有统计学意义(P<0.05)；Grb2、MAPK1基因的表达与对照组比较,差异无统计学意义。研究结论：本研究通过对椿皮的提取与MTT实验相结合的方法,确定乙酸乙酯萃取部位为椿皮抗肿瘤的有效部位。进一步的研究发现,椿皮抗肿瘤有效部位有诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡的作用,能降低人胃癌细胞株MGC-803的Ras/MAPK信号传导通路中SOS1、HRAS、MEK2、Raf-1、MEK1基因的表达。