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本课题系统收集了从广西大王岭和大明山两个自然保护区共采集到土样264份,共分离出597株芽孢杆菌,通过光学和电子显微镜检观察,16株分离株观察到伴胞晶体蛋白,初步确定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt),出菌率为6.06%。在16株Bt分离株中,有4株在芽孢形成过程中能产菱形晶体蛋白,其余12株能产圆形和其他形状的晶体蛋白。利用PCR-RFLP方法和SDS-PAGE方法对16株Bt分离菌进行了蛋白和基因型的鉴定,结果表明,16株分离株中,4株含有crylAc基因,表达约130 kDa的晶体蛋白,其中含有cry30基因和cry40基因的菌株分别1株和3株,表达大约75kDa的晶体蛋白;另外8株Bt菌株表达蛋白大小不一,其基因型尚不能确定,有待进一步分析。生物测定表明,产菱形晶体含有crylAc基因的4株Bt分离株对鳞翅目小菜夜蛾幼虫有很强的毒杀活性,而其它分离株对小菜夜蛾没有毒杀活性。
苏云金芽孢杆菌分离株S2096-2是从中国广西大王岭自然保护区采集的土壤样品中分离得到的,伴随芽孢形成能产生椭圆形伴胞晶体。经过PCR-RFLP系统鉴定,它含有cry40基因,对其进行亚克隆和测序,序列表明该基因编码区(ORF)为1977bp,其编码658个氨基酸,分子量为75kDa,对该蛋白的空间结构进行预测表明该蛋白由具有不同功能的三个结构域有规律的结合在一起。初步的生物活性测定表明该蛋白对蚊虫幼虫的具有很强的杀虫活性,该cry40基因已在GenBank基因库中注册,基因登录号为EU596478,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry40Da1。