论文部分内容阅读
中药复方配伍规律研究是中医药研究领域的重点和难点问题。对药是单方和复方之间的桥梁,而君-使对药则是由复方中的君药和使药搭配而成的特殊对药,集中体现了复方君臣佐使配伍和“七情”关系,且具有组成简单,易于开展研究的特点。因此,研究君-使对药的作用机制能驭繁就简的揭示复方配伍内涵,对丰富和发展复方配伍理论和重大新药的创制具有重要意义。本论文选择丹参-降香为研究对象,以丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛为指标物质,围绕使药降香对君药丹参药代动力学和体内效应物质的影响展开研究,主要研究内容如下:1.建立了含药血浆中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛同时测定的高效液相色谱分析新方法。方法学考察表明,丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛的检出限分别为0.031、0.008、0.004μg/mL,分别在0.031～4.0μg/mL、0.016～2.0μg/mL、0.008～1.0μg/mL范围内线性关系良好,低、中、高三个浓度丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛的提取回收率在88.62～95.80%之间;方法回收率在86.26～98.40%之间;日内日间精密度、重现性和稳定性的测定结果符合FDA生物样品分析测定的要求,可用于丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛的药代动力学研究。2.采用上述高效液相色谱方法,研究了正常兔体内丹参素和原儿茶酸单体的药代动力学过程。在此基础上,用该方法考察了兔灌服丹参素-降香、原儿茶酸-降香、丹参和丹参-降香提取液后,丹参素和原儿茶酸药代动力学过程的差异性。结果表明:灌服上述样品溶液后,丹参素和原儿茶酸在兔体内的药代动力学过程均符合二室开放模型;丹参中存在能使丹参素吸收速率加快,生物利用度提高的物质;使药降香能使丹参素和原儿茶酸单体以及君药丹参中的丹参素和原儿茶酸吸收速率减慢,吸收入血量增加,生物利用度提高,消除减慢,分布时间延长,印证了使药降香的增效-导向作用,为阐明丹参-降香的体内作用机制提供了依据。3.通过主成分分析和Granger因果分析法对上述色谱数据进行分析,确定了NM19、ES21、ES23、ES32、ES34五个未知成分是丹参-降香配伍前后引起色谱数据发生显著变化的关键物质。在此基础上,对NM19、ES23、ES32三种成分在β2-AR生物色谱上的保留行为进行了研究,发现上述三种成分与β2-AR存在特异性相互作用。进一步通过高效液相色谱-质谱联用技术对NM19、ES23、ES32进行了定性分析,确定ES23和ES32的分子量分别为204.2和179.0,鉴定ES23为色氨酸,ES32为马尿酸。