多肽、蛋白质等生物分子的分离纯化需要高性能的分离介质,而作为分离介质基质的琼脂糖存在微球粒径不均一、机械强度低、孔径表征困难的问题。为了提升琼脂糖分离介质的粒径均一性、分辨率和操作流速,本文以琼脂糖为主要原料,采用膜乳化法制备了一种粒径小且均一的琼脂微球,并通过交联和接枝反应制备了琼脂糖基质高分辨率凝胶色谱介质。论文主要研究内容如下:（1）实验室在前期工作中使用膜乳化技术成功制备了粒径均一、可控的琼脂糖-葡聚糖复合微球。结合以往研究经验,本论文探究了多孔玻璃膜管的孔径大小对于琼脂糖微球粒径大小和均一性的影响,成功制备出了均一的小粒径琼脂糖微球(d0.5≈9.8μm,Rspan＜0.5)。同时对于膜管使用次数进行了研究。（2）为了解决琼脂糖微球的孔径大小和分级范围可调控问题,本论文提出了在琼脂糖微球上接枝不同分子量葡聚糖的方法。通过向琼脂糖微球上引入葡聚糖,大幅度改善了琼脂糖微球的排阻极限以及蛋白分辨率。使用逆体积排阻色谱法测定葡聚糖接枝型琼脂糖微球的孔径大小及分布,探究了微球的孔结构、蛋白分离度与接枝葡聚糖分子量的关系。将本方法制备的最优介质与商品介质进行比较,其分辨率相当。同时,实现了排阻极限可调。这为高分辨率尺寸排阻介质的工业化应用奠定了良好基础。（3）为了解决常规交联方法存在的交联效率低、微球强度不足等问题,本文论文对于交联反应中氢氧化钠浓度、交联剂种类等因素进行优化,在最佳工艺条件下,琼脂糖微球最高流速可达1.4 m L/min,较之前的交联微球提高了40%以上。（4）使用自制琼脂糖介质分离了脾氨肽混合组分,获得了5-8个洗脱峰。在含有氯化钠的磷酸盐流动相条件下,介质对于脾氨肽成分形成了吸附保留,脾氨肽的保留体积随流动相中氯化钠浓度的增加而减小,流动相中氯化钠浓度的增加削弱了吸附作用,流动相的p H值从2-13升高的过程中保留减弱,表明介质与脾氨肽组分之间形成的是一种氢键吸附与静电相互作用混合模式的吸附。