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目的1、选择性构建3条特异性抑制CXCR4的RNA干扰载体并设阴性对照，特异性沉默胃癌细胞SCG-7901中的CXCR4基因并检验其效率。2、通过特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4（CXCR4）的表达，检测RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法1、在GENBANK中检索基因CXCR4序列，设计4条短发夹RNA（shRNA）并经同源性检索无误后合成，合成重组腺病毒载体shpAd-hCXCR4-eGFP。将重组腺病毒质粒进行超纯提取后，将腺病毒载体转染至HEK293A细胞，通过eGFP基因绿色荧光表达检测转染情况并进行病毒包装，终点稀释法测定病毒滴度。以最佳感染指数（MOI）转染胃癌细胞SGC7901后，利用RP-PCR和Western-blot检测各组沉默效率，筛选出沉默效率最高的一组。2、分别以最佳MOI转染实验组和阴性对照组，并设立空白对照组。将转染后的胃癌细胞分别利用RT-PCR和Western-blot检测重组腺病毒载体沉默CXCR4基因mRNA和蛋白的表达情况。MTT法绘制生长曲线，检测重组腺病毒载体对胃癌细胞SGC7901的增殖的抑制作用。细胞侵袭实验检测重组腺病毒载体对胃癌细胞SGC7901侵袭力的影响。结果1、经基因测序、酶切鉴定及PCR检测结果表明，重组腺病毒载体shpAd-hCXCR4-eGFP构建成功。2、荧光倒置显微镜下观察到转染重组腺病毒表达载体及其阳性、阴性对照的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达并有明显的细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE）。腺病毒包装成功，病毒滴度检测分别为4×109PFU/ml。最佳MOI=100，腺病毒载体最佳转染体积为12.5μl。3、将shpAd-hCXCR4-eGFP转染至胃癌细胞SCG-7901后，检测RT-PCR及Western blot结果表明：CXCR4-shRNA1组的CXCR4mRNA及蛋白表达量明显低于其他两组，具有显著性差异（P＜0.05）；三组实验组与空白组之间具有显著性差异（P＜0.01）。测定CXCR4-shRNA1组沉默效率最高，效率为78.08%。4、将CXCR4-shRNA1转染至胃癌细胞SGC-7901后，MTT法绘制生长曲线结果表明：空白组与对照组细胞生长迅速，两组之间无显著性差异（P＞0.05）,实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少，与前两组相比有显著性差异（P＜0.05）。5、细胞侵袭实验结果表明：在SDF-1的趋化24h后，空白组、阴性对照组和实验组三组穿膜的细胞数量分别为264.7±15.7、270.5±16.9、113.8±9.2，shRNA-CXCR4腺病毒载体比较空白组和对照组穿膜细胞数量明显减少，具有显著性差异（P＜0.05）。而空白组与对照组相比数值没有明显的减少，无显著性差异（P＞0.05）。结论1、成功构建CXCR4-shRNA腺病毒表达载体并筛选出沉默效率最高的一组。2、成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC-7901并证明重组腺病毒载体CXCR4-shRNA可抑制胃癌细胞SCG-7901中CXCR4基因的mRNA和蛋白的表达。3、重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。4、重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能降低胃癌细胞SGC-7901的侵袭力。