细粒棘球绦虫及驱虫药—吡喹酮和狂犬病弱毒疫苗复合剂的研究

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细粒棘球蚴病(cystic echinococcosis,也称包虫病)是世界性分布的人兽共患寄生虫病,内蒙古自治区是全国包虫病的重点防控地区,但对本病的认识与治理一直没有引起应有的重视,防控效果一直不理想。本研究对内蒙古地区细粒棘球蚴和细粒棘球绦虫(E chinococcus granulosus)的主要宿主进行了流行病学调查,并且对细粒棘球蚴内蒙古株的CO1、ND1基因进行了遗传进化分析。同时研制了细粒棘球绦虫驱虫药—吡喹酮与狂犬病弱毒疫苗的复合制剂。研究结果如下:1.终末宿主-犬体细粒棘球绦虫抗原检测结果表明:内蒙古地区犬细粒棘球绦虫病高发区分别为,乌拉特中旗、东乌旗、西乌旗、四子王旗,锡林浩特市。样品阳性率由高至低分别为20%、13.8%,13.3%、8%、3.8%。2.中间宿主羊,牛,人感染情况结果显示:西乌旗成年羊细粒棘球蚴感染率低;幼年羊与牛均未发现感染细粒棘球蚴病。6名疑似包虫病患者手术摘取包囊后,寄生虫学检测结果证实为细粒棘球蚴感染。3.中国内蒙古地区人株、羊株CO1基因序列长度均为936bp,通过Blastp同源性比对,发现羊株细粒棘球蚴CO1基因序列与蒙古国细粒棘球蚴的CO1基因序列相似性最高,人株细粒棘球蚴CO1序列与伊朗细粒棘球蚴的CO1基因序列相似性最高,相似性均在99%以上,基因型均是G1型。4.内蒙古地区人株、羊株NDl基因序列长度均为895bp,通过Blastp同源比对,证实羊株细粒棘球蚴ND1序列和人株细粒棘球蚴ND1序列完全相同,内蒙古株ND1基因序列与伊朗细粒棘球ND1基因序列相似性为100%,基因型也均为G1型。5.驱虫药和疫苗复合剂研制过程显示,吡喹酮和狂犬病弱毒疫苗在含1%的吐温-80的乳酸乙酯-异丙醇溶液中比较稳定,后者适宜作为前者的复合溶媒。6.利用高效液相色谱法,分别测定了药物溶液和吡喹酮-狂犬病弱毒苗复合剂中的吡喹酮含量均在90%以上,符合要求。上述溶液和制剂置于保存狂犬病疫苗的条件下,无沉淀发生,药物含量、pH值、澄明度都符合要求。7.吡喹酮-狂犬病弱毒苗复合剂小鼠异常毒性实验结果表明:小鼠健康状况良好,无死亡现象;豚鼠局部刺激实验表明:注射部位无明显红肿和充血现象。8.筛选了高效液相色谱法测定家兔血浆中吡喹酮的前处理方法。结果证明,家兔血浆中吡喹酮萃取的理想物质为乙腈;并建立了以乙腈和水对吡喹酮进行梯度洗脱测定吡喹酮含量的HPLC方法。9.实验动物狂犬病弱毒苗-吡喹酮复合剂药代动力学研究显示,血浆中吡喹酮含量的变化趋势与单独吡喹酮溶液给药相比,呈现相似的情形,即给吡喹酮药液或复合剂后,15mmin迅速增加,在1h达到峰值,在4h含量达到低值,此后代谢缓慢,在24h仅能检测到微量吡喹酮成分。
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