基于扩繁F2的番茄结果数的ISSR分析

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:andrew142
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筛选和培育座果率高的品种是提高番茄产量最为有效的方法之一。开展番茄座果性状的QTL定位,有助于建立番茄分子标记辅助选择育种体系,获得更多的优良材料,从而促进遗传育种水平的显著提高。本研究的主要内容和结论如下:1.番茄再生体系的优化以番茄为材料进行组织培养再生实验,研究不同的种子消毒方法的效果,激素及激素浓度对番茄再生的影响,及运用分多步炼苗的方法移栽的成活率。结果表明,用NaCIO消毒番茄种子13min为最佳;玉米素对番茄再生的效果最好,表现为出芽多,且出芽速度相对其他激素快。MS+0.5mg/L ZA+0.1mg/L IAA对番茄再生的效果为最佳,且效果显著;炼苗中采取试管苗开瓶注水适应,再转入装有用蛭石、珍珠岩、泥炭土、有机肥按照2:2:1:1的比例配制的基质的穴盘中适应7d,再转入装有同样基质的营养钵适应7d,最后移入大田的分级炼苗方法,成功的克服了移栽成活这一难关。2.番茄ISSR体系的优化以部分番茄品种作为材料,对番茄ISSR-PCR反应体系的中的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶浓度、模板DNA浓度、引物浓度以及退火温度进行了探讨,确立了适合番茄的ISSR分析的技术体系。在20uL反应体积中,其中25 mmol/L MgCl2 2.0 uL,10×PCR Buffer 2.0 uL,10 mmol/L dNTP 0.5 uL,5 U/ uL Taq E 0.5 uL,20ng/ uL Primer 1.5 uL,10ng/ uL模板DNA 3 uL,灭菌双蒸水10.5 uL为最佳。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃复性1 min,72℃延伸2 min,35个循环;72℃延伸5 min。3.番茄结果数的ISSR相关性分析对扩繁得到的F2个体提取DNA,并利用筛选的ISSR引物对扩繁的F2代番茄进行PCR反应,并进行电泳。在电泳图上与母本条带一致的记为0,与父本条带一致的记为1,利用统计软件进行分析,找到与座果性状紧密联系的标记。本试验采用单因素分析和多因素回归分析得到了相同的结果,即marker 51与番茄座果性状与相关性最紧密,也就是884号引物在大约250pb的地方的条带。
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