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利用现有生物数据库中的茶树EST资源,在了解茶树EST中SSR的信息的基础上首次建立了EST-SSR标记,同时对其在品种资源分析中的应用和相关物种中的通用性进行了探讨。主要结果如下: 明确了茶树EST中SSR的频率及特性。从NCBI公共数据库下载获得1989条茶树EST,去除其中的低质量的和冗余的序列,得到全长为734.54kb的1589条无冗余EST。共在这些序列中发掘出了281个EST-SSR,分布于246条EST中,出现频率是17.68%。这些EST-SSR的平均长度为33.06bp,平均分布频率是1/2.61kb。茶树EST-SSR中,二核苷酸重复是主要的重复类型,出现最多的重复基元是AG/CT重复。茶树EST中SSR信息的明确为进一步建立和应用EST-SSR标记奠定了基础。 建立了茶树EST-SSR标记。本研究首先优化了茶树DNA的CTAB提取法。通过比较在提取液中添加不同浓度的Vc、PVP及β—巯基乙醇对提取效果的影响,发现添加0.1%的Vc可有效提高DNA的质量及产率。设计了16对SSR引物,在对引物、dNTP、MgCl2的浓度及退火温度等参数进行测试后,建立了合适的PCR反应体系。以衍生绝大多数EST的龙井43DNA为模板,对引物进行了筛选,有13对引物显示扩增,可用率为81.3%;进一步在10个茶树品种中进行多态性测试,显现出多态性的引物占可扩增引物的53.8%。研究结果证明了根据茶树EST建立SSR标记是有效、可行的。 研究了EST-SSR标记在茶树资源分析与品种鉴定中的作用。采用上述16对EST-SSR引物对42份茶树品种资源进行了分析。在这些引物中,有13对可扩增出清晰条带,其中10对引物具有多态性,占76.9%。各多态性引物的PIC值变化范围为0.522～0.866,平均PIC值为0.730。10对多态性引物共检测到84种基因型和74个等位变异,每对引物可检测到的基因型数和等位基因数分别为4～12和3～10种。42份供试材料间遗传距离为0.074～0.667,平均为0.363,说明本试验所测试的材料具有较广的遗传变异。在相似系数为0.55的水平可将这些材料聚为3类,多数材料包含在第一类中。这些结果说明利用EST-SSR标记对茶树资源评价是有效的。 探讨了茶树EST-SSR标记对远源物种水稻、高粱及白菜的通用性。利用16对EST-SSR引物,对水稻、高粱和白菜分别进行了测试,其中有8对在3种物种中都能扩增出产物。对水稻、高粱和白菜的扩增比率分别为62.5%、75%和68.8%,其中显示多态性的引物比例分别为60.0%、50.0%和36.4%。此结果说明茶树EST-SSR标记在远缘