吡喃酮合酶基因g2ps1导入大豆及其转化株的鉴定

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本研究诣在利用花粉管通道法将吡喃酮合酶基因g2psl导入豆,创建转基因大豆新种质.吡喃酮合酶基因g29sl参与次生代谢产物菊花素和花椒素的生物合成,菊花素、花椒素及其衍生物花椒酸可以抗一些昆虫,并能抑制细菌和真菌的生长.鉴于大豆病虫害是严重威胁大豆生产的重要因素,g2psl基因在大豆中的表达将会对病虫害起到一定的抑制作用. 本研究于2003年,将来自非洲菊的吡喃酮合酶基因g29sl的质粒表达载体phtt376通过花粉管通道导入大豆栽培品种南农73-935、HF4121.经PeR检测,有3株呈阳性,其中品种南农73—935中有1株,品种HF4121中有2株,初步证明g2psl基因已整合到大豆基因组中.以phtt376质粒DNA的PCP产物为阳性对照,以非转基因植株的PCR产物为阴性对照,与探针杂交的结果表明:3株转基因单株均出现与阳性对照大小完全一致的杂交带,说明PCR产物确实是g2psl基因的片段,而不是大豆基因组中的同源序列.对所获得的3株转基因植株(T<,1>代)采用室内饲喂法进行抗虫性鉴定,所试虫种为斜纹夜蛾1龄幼虫,以幼虫重和蛹重作为评价转g2psl大豆的抗性指标.因材料有限,采摘3株转基因植株的叶片混合在一起喂养斜纹夜蛾幼虫,且在第10天称过幼虫重后,全部用对照株的叶片喂养斜纹夜蛾.数据分析表明,转基因大豆对斜纹夜蛾幼虫的生长发育有明显的抑制作用,其饲养的幼虫重和蛹重仅为对照的64%和87%. 此外,本研究于2003年,利用花粉管通道法还获得3株转非洲菊赤霉素诱导基因geg(参与细胞和器官形态调节)的转化株,经PCR检测呈阳性.
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